[发明专利]一种基于免疫磁分离技术和生物发光技术的大肠杆菌的检测方法

权利要求书

1.一种基于免疫磁分离技术和生物发光技术的大肠杆菌的检测方法，其特征在于：包括如下步骤：

1)将生物素与大肠杆菌抗体偶联，得到生物素化的大肠杆菌抗体；

2)生物素化的大肠杆菌抗体和链霉亲和素修饰的磁性纳米颗粒混合，制备磁性纳米探针；

3)使用PBS缓冲液冲洗磁性纳米探针后，将磁性纳米探针加入到大肠杆菌溶液中，培养，使大肠杆菌被磁性纳米探针捕获；

4)捕获大肠杆菌后的溶液置于离心管中，在离心管的一侧放置磁性分离架，将捕获有大肠杆菌的磁性纳米探针进行富集；

5)采用清洗液对步骤4)中富集的样品进行清洗，得到用于ATP发光的溶液，磁性纳米探针被磁性分离架富集分离；

6)向步骤5)中得到的用于ATP发光的溶液中加入ATP擦除剂设定时间后，去除溶液中体细胞和游离ATP，再加入细菌裂解剂，对大肠杆菌进行裂解；

7)向步骤6)中裂解后的溶液中加入荧光素和Mg²⁺，通过检测溶液的荧光强度，计算得到大肠杆菌的数量。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤1)中，生物素与大肠杆菌抗体的摩尔比为1:1。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤2)中，磁性纳米颗粒的粒径为1-100nm。

4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于：磁性纳米颗粒的粒径为60-80nm。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤3)中，培养的时间为5-15min。

6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于：步骤3)中，培养的时间为10min。

7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤5)中，所述清洗液为10m mol/L的PBS缓冲液，PBS缓冲液中的Tween-20的质量分数为0.05％。

8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤7)中，加入的荧光素和Mg²⁺过量。

9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤4)-步骤7)在暗室中进行。

10.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤7)中，采用光电倍增管收集反应释放的荧光，其峰值波长范围为500-600nm。