[发明专利]一种透明质酸发酵的补料方法

权利要求书

1.一种透明质酸发酵的补料方法，其特征在于：包括如下步骤：

（1）活化菌种：将兽疫链球菌接种至斜面菌种培养基上，得到活化的兽疫链球菌菌种；

（2）配制种子培养基：取适量的葡萄糖、酵母粉、蛋白胨、磷酸氢二钾和硫酸镁，倒入种子培养基内进行混合后灭菌；

（3）将步骤（1）活化得到的兽疫链球菌菌种接种至步骤（2）制得的种子培养基上进行培养，得到种子液；

（4）将步骤（3）培养得到的种子液接种至扩大培养基中进行扩大培养，得到扩大培养液；

（5）取适量的磷酸氢二钾、蛋白胨、酵母粉和纯化水，进行混合并充分溶解后，倒入补料罐内的补料培养基上，进行灭菌处理，得到混合液a；

（6）取适量的葡萄糖、硫酸镁和井水中，进行混合并充分溶解后，倒入发酵罐内的发酵培养基上进行灭菌处理，得到混合液b；

（7）将混合液a倒入发酵罐内的发酵培养基内；

（8）将步骤（4）得到的扩大培养液接种至发酵罐内进行发酵培养。

2.根据权利要求1所述的一种透明质酸发酵的补料方法，其特征在于：所述步骤（2）种子培养基的成分及含量分别为：葡萄糖5-15g/L，酵母粉5-10g/L，蛋白胨5-20g/L，磷酸氢二钾1-5g/L，硫酸镁 0.1-1g/L。

3.根据权利要求2所述的一种透明质酸发酵的补料方法，其特征在于：所述步骤（2）的灭菌过程持续20-30min，温度119-123℃。

4.根据权利要求1所述的一种透明质酸发酵的补料方法，其特征在于：所述步骤（3）种子液的培养条件为通风发酵5-15h，温度34-37℃，用20～35%的NaOH水溶液控制pH值保持6.0-8.0。

5.根据权利要求1所述的一种透明质酸发酵的补料方法，其特征在于：所述扩大培养基的成分及含量与种子培养基一致。

6.根据权利要求1所述的一种透明质酸发酵的补料方法，其特征在于：所述步骤（5）的混合液a占发酵液总体积的5-20%，所述步骤（6）的混合液b占发酵液总体积的70-85%，所述步骤（5）和步骤（6）的灭菌时间均为持续20-30min，温度119-123℃。

7.根据权利要求1所述的一种透明质酸发酵的补料方法，其特征在于：所述步骤（7）发酵培养基的成分及含量分别为：葡萄糖30-100g/L，酵母粉5-10g/L，蛋白胨5-20g/L，磷酸氢二钾1-5g/L，硫酸镁 0.1-1g/L。

8.根据权利要求1所述的一种透明质酸发酵的补料方法，其特征在于：所述步骤（7）的混合液a通过分批补料或连续补料的方式倒入发酵罐内的发酵培养基内。

9.根据权利要求1所述的一种透明质酸发酵的补料方法，其特征在于：所述步骤（8）通风发酵14-30h，温度34-39℃，用20～35%的NaOH水溶液控制pH值保持6.0-8.0，转种量为5-15%。

10.根据权利要求1所述的一种透明质酸发酵的补料方法，其特征在于：所述纯化水为饮用水经蒸馏法、离子交换法、反渗透法或其他适宜的方法制得的供药用的水，不含任何添加剂。