[发明专利]一种透明质酸发酵的补料方法

说明书

本发明公开了一种透明质酸发酵的补料方法，将兽疫链球菌接种至斜面菌种培养基上，得到活化的兽疫链球菌菌种；取适量的葡萄糖、酵母粉、蛋白胨、磷酸氢二钾和硫酸镁，倒入种子培养基内进行混合后灭菌；将活化得到的兽疫链球菌菌种接种至种子培养基上得到种子液，将种子液接种至扩大培养基中进行扩大培养得到扩大培养液。本发明的有益效果：通过分批或连续补料的方式转入发酵罐进行接种发酵，提高发酵液中的Ca、Mg离子浓度，减少前期发酵液在制备过程中各成分之间的反应，减少营养成份的破坏，并提高营养成分的利用率，利于发酵的进行，发酵粘度达到63750mPa·s，有助于提高发酵质量和产量。

技术领域：

本发明属于微生物发酵技术领域，具体涉及一种透明质酸发酵的补料方法。

背景技术：

透明质酸也称为玻璃酸 (Hyaluronic acid简称HA)，是由Meyer和Plamer于1934年首先从牛眼玻璃体中分离得到的一种广泛存在于动物和人体结缔组织细胞外基质以及部分细菌中的一种高分子直链酸性粘多糖。经过半个多世纪的研究，对其结构、理化性质、生理功能和临床应用方面已有了明确的认识，其分子结构是由 D-葡萄糖醛酸(glucuronicacid)和 N-乙酰氨基-D-葡萄糖胺(N-acetyl glucosamine)通过 B-1,4 和B-1,3 糖苷键反复交替连接而成，分子量在 1.0×10⁵～4.0×10⁶ Da 之间。

透明质酸具有良好的保湿作用，又是皮肤和其他组织中广泛存在的天然分子，其优良的性能已受到国际化妆品界的广泛关注。目前，透明质酸化妆品类已经从最初的膏霜、乳液、化妆水、精华素胶囊、贴膜，扩展到浴液、粉饼、口红、洗发护发剂、摩丝等。

制备透明质酸主要有以下的途径：一是从动物组织中分离提取；二是通过微生物发酵法获得。动物组织提取法是最早采用的透明质酸生产方法，但这种生产方法原料来源局限性大，产品提取率极低，仅为1%左右，工艺程序复杂，生产成本居高不下，造成商品价格昂贵，限制了它在医药和化妆品中的广泛应用,不宜进行大规模工业化生产。此外，二十世纪八十年代后，越来越多的证据显示一些含有动物组织来源原料的产品，对使用者存在潜在的危险，包括中国在内的许多国家，明令限制含有这些原料的化妆品、口服保健品及药品的销售与使用。而微生物发酵法具有许多优点，比如成本低，生产规模不受原料限制，易于分离纯化，易于形成规模化工业生产。

透明质酸发酵对培养基的营养比较挑剔，比如对氮源要求非常苛刻，必须不同氮源搭配使用，实现培养基优势互补，才能收到较好的发酵效果。再者要求培养基具备较高Ca、Mg离子浓度，Ca主要通过井水硬度提供，Mg元素通过在培养基中添加硫酸镁提供。但培养基中的磷酸氢二钾极易与Ca、Mg离子反应形成沉淀，特别是在高温条件下更能加速反应，酵液中无法保持较高的Ca、Mg离子浓度，最终造成营养成份的浪费，不利于发酵的进行，发酵粘度不稳定，无法取得较好的发酵效果，大大影响发酵的产量。

发明内容：

本发明就是针对上述问题，提供了一种透明质酸发酵的补料方法，使用诱变选育的兽疫链球菌作菌种，葡萄糖、硫酸镁溶于井水后在发酵罐内进行灭菌，酵母粉、蛋白胨、磷酸氢二钾营养物质溶于纯化水后在补料罐内灭菌，然后通过分批或连续补料的方式转入发酵罐进行接种发酵，提高发酵液中的Ca、Mg离子浓度，减少前期发酵液在制备过程中各成分之间的反应，减少营养成份的破坏，并提高营养成分的利用率，利于发酵的进行，发酵粘度达到63750mPa·s，有助于提高发酵质量和产量。

为了实现本发明的上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种透明质酸发酵的补料方法，包括如下步骤：

（1）活化菌种：将兽疫链球菌接种至斜面菌种培养基上，得到活化的兽疫链球菌菌种；

（2）配制种子培养基：取适量的葡萄糖、酵母粉、蛋白胨、磷酸氢二钾和硫酸镁，倒入种子培养基内进行混合后灭菌；