[发明专利]一种MC3T3-E1成骨细胞氧化应激测试方法

说明书

本发明属于医学技术领域，公开了一种MC3T3‑E1成骨细胞氧化应激测试方法，将经病理学检查确认为病变骨组织的标本置于含10％～12％胎牛血清的1640培养液的已消毒培养皿中，培养皿四周事先铺好冰块，于无菌操作台内迅速移入内含青霉素100U/ml、链霉素100μg/ml的双抗的PBS液中洗涤3次～5次；用组织剪剔除脂肪组织、坏死组织；用PBS液冲洗3次～5次后放入10％～12％胎牛血清的1640培养液浸泡等。本发明有助于阐明氧化应激在骨质疏松症发病机制中的作用，为抗骨质疏松症新药的研制提供一定的理论依据。本测试方法简单、有效，便于实施。

技术领域

本发明属于医学技术领域，尤其涉及一种MC3T3-E1成骨细胞氧化应激测试方法。

背景技术

目前，业内常用的现有技术是这样的：

骨质疏松症是老年常见的骨病，其特点是骨密度降低以及骨折风险明显增加，严重影响着老年人的生活质量。随着平均寿命的增加，骨质疏松症的患病率及其相关的并发症如骨折的发生率在不久的未来都将进一步的增加。老龄性骨质疏松症的诊断主要是通过骨骼的影像学检查、骨密度检测以及血液骨转换生化标志物的检测。尽管现在针对骨质疏松症的诊断和治疗策略很多，但仍无法降低骨折的发生率。因此，发展新的诊断和治疗策略是至关重要的。骨是一个基于持续的骨形成和骨吸收的稳定的动态结构。这两个过程必须是平衡的，一旦失调就会产生病理性的结构。以往，雌激素缺乏被认为不仅是女性，而且还是男性骨质疏松症发生的主要原因。更年期卵巢功能的降低导致了骨量的丢失，同时雌激素的替代可以阻止这种情况的发生，所以，成年人骨量的丢失始于性激素水平的下降。然而，大型流行病学研究已经清楚的证明，男性和女性的骨量丢失是发生在性激素改变之前，即在三十岁左右。因此，性激素缺乏并不能用来全面解释骨质疏松症的发生和发展。已有大量的证据表明随着机体的老化，体内增加的活性氧(Reactive oxygen species,ROS)引起的氧化应激可以影响骨的体内平衡。发展新的治疗手段的，需要了解ROS如何参与调节骨的生物学、生理学和病理学。大量研究证据表明，ROS特别是H2O2和一些超氧化物，参与了细胞内不同的信号通路，包括丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-Activated Protein Kinas,MAPKs)，细胞内钙离子水平和转录因子的调控。ROS在促进氧化应激和疾病方面的有害影响近年来已引起高度关注。其中，氧化应激和骨质疏松症之间的关系是近年来研究的重点。

综上所述，现有技术存在的问题是：

现有技术，不能有效测试出氧化应激刺激能引起细胞的死亡，不能有助于解释氧化应激在骨质疏松症发病机制中的作用，不能为抗骨质疏松症新药的研制提供有效的理论依据。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种MC3T3-E1成骨细胞氧化应激测试方法。

本发明是这样实现的，一种MC3T3-E1成骨细胞氧化应激测试方法，所述MC3T3-E1成骨细胞氧化应激测试方法包括：

将经病理学检查确认为病变骨组织的标本置于含10％～12％胎牛血清的1640培养液的已消毒培养皿中，培养皿四周事先铺好冰块，于无菌操作台内迅速移入内含青霉素100U/ml、链霉素100μg/ml的双抗的PBS液中洗涤3次～5次；用组织剪剔除脂肪组织、坏死组织；用PBS液冲洗3次～5次后放入10％～12％胎牛血清的1640培养液浸泡；

使用眼科剪剪碎为0.5mm³大小的块状，使用0.15％胰酶消化分解切碎的样本；通过无菌240目筛网过滤器过滤后将滤网表面的组织收集到一新100ml离心管内，用离心机1500rpm×5分钟分离细胞；清洗五次后1640培养液重悬而后加入10％～12％的胎牛血清6×10⁵细胞/毫升；最后MC3T3-E1细胞在5％～8％的CO₂ 37℃的环境下孵育培养；制成MC3T3-E1细胞悬液；