[发明专利]快速检测流产亲衣原体病的引物及所构成的试剂盒

说明书

本发明公开了本发明的目的是提供一种能够快速检测流产亲衣原体，进而实现快速检测牛、羊、猪等多种动物由于流产亲衣原体感染所引起的流产亲衣原体病的引物及所构成的试剂盒。本发明根据RPA引物设计原则设计若干对RPA特异性引物，经RPA扩增试验，从中筛选出1对特异性高、敏感性强的RPA引物，所选出的1对RPA引物为：上游引物的DNA序列为<210>2，下游引物的DNA序列为<210>3，以该引物为基础建立了检测Cp.abortus核酸的RPA‑LFA可视化快速检测体系。与常规PCR方法相比，利用RPA‑LFA可视化检测引物对Cp.abortus核酸检测具有对仪器设备要求低，只需要恒温水浴锅，检测速度快，约40min左右，检测结果的可视化，即可直接用肉眼观察等优点，非常适用于牛羊Cp.abortus感染的快速检测和诊断。

技术领域

本发明涉及一种快速检测流产亲衣原体，进而实现快速检测牛、羊、猪等多种动物由于流产亲衣原体感染所引起的流产亲衣原体病的引物及所构成的试剂盒，属生物技术领域。

技术背景

流产亲衣原体病是由流产亲衣原体(Chlamydophila abortus，Cp.abortus)所引起的一种人兽共患传染病，该病不但威胁牛羊等反刍动物养殖业，而且对怀孕妇女造成一定的威胁。

Cp.abortus可以感染牛羊等反刍动物羊，类细胞内寄生的革兰阴性原核型微生物。流产衣原体可以在牛、羊、猪等多种动物生殖道黏膜表面的上皮细胞内寄生，可引起患病动物生殖道黏膜的损伤，从而导致母畜流产、早产、死胎等，还可引起患病公畜的睾丸炎、尿道炎、龟头和包皮炎。

Cp.abortus是一类细胞内寄生的革兰阴性原核型微生物，直径0.2～0.5μm，能够通过0.45μm的滤器，属于衣原体科(Chlamydiaceae)、衣原体属(Chlamydia)。衣原体目下设有8个科，其中衣原体科只含有衣原体属，包括有12个种，即沙眼衣原体(C.trachomatis)、猪衣原体(C.suis)、鼠衣原体(C.muridarum)、肺炎衣原体(C.puemoniae)、流产衣原体(C.abortus)、鹦鹉热衣原体(C.psittaci)、猫衣原体(C.felis)、豚鼠衣原体(C.caviae)、反刍动物衣原体(C.pecorum)、鸟衣原体(C.avium)、家禽衣原体(C.gallinacea)和朱鹭衣原体(C.ibidis)

目前，流产亲衣原体病在全世界广泛流行。从八十年代开始来，我国邱昌庆、周继章等人相继在山东、河北、河南、陕西、宁夏、甘肃、青海和四川、广西、安徽和江苏等省区的肉牛、黄牛、牦牛和水牛血清样品中检测出Cp.abortus抗体，阳性检出率为3.3-39.3％。Cp.abortus主要寄生于牛羊生殖道黏膜表面的上皮细胞内。母畜典型的临床症状是妊娠后期流产，绝大多数发病是由于牛羊在怀孕前就已处于流产衣原体的持续性感染，在怀孕前不会表现流产衣原体的感染症状。母畜在流产后会获得免疫保护并且可以进行成功的繁殖，但其仍成为衣原体的携带者，会在以后的发情期将大量的病原排出体外，成为重要的传染源。孕妇与感染的牛羊直接接触也会造成急性流产。

在临床上，牛羊流产亲衣原体病引起的流产与布鲁菌病、李斯特菌病和空肠弯曲菌病很相似，依据临床症状和剖检病理变化观察只能进行初步诊断，确诊需要依赖于实验室检测。目前，实验室常用的Cp.abortus检测方法包括病原学检测、血清学检测和分子生物学检测。

Cp.abortus的病原学检测包括染色涂片、电镜观察和病原分离培养。碘染色法具有简单快速的优点，但是其灵敏度不高，假阳性高。电镜观察虽然可以在检测流产衣原体的同时观察衣原体的细胞结构，但需要贵重的仪器设备，限制了基层实验室的应用。Cp.abortus的分离培养分为鸡胚分离培养法和细胞分离培养法，但是鸡胚培养法费时费力，且初次培养时间较长，病原的分离培养非常困难。细胞培养法来培养衣原体，方法结果可靠，但也需要有较高的实验条件。