[发明专利]用于生物芯片检测金黄色葡萄球菌的探针组序列

权利要求书

1.一种用于生物芯片检测金黄色葡萄球菌的探针组序列，其特征在于：每个探针组均包括捕获探针CP、检测探针DP、滚环探针RCP，其中，所述DP由DP-A、DP-B和DP-C三部分依次连接组成；所述RCP为共用探针。

2.根据权利要求1所述的用于生物芯片检测金黄色葡萄球菌的探针组序列，其特征在于：捕获探针CP、检测探针DP共有4组，序列分别如下：

CP1如5′-NH₂-SEQ ID NO：1-3′所示，DP1如5′-SEQ ID NO：2～4-3′所示，其中，DP1-A如SEQ ID NO：2所示，DP1-B如SEQ ID NO：3所示，DP1-C如SEQ ID NO：4所示；

CP2如5′-NH₂-SEQ ID NO：5-3′所示，DP2如5′-SEQ ID NO：6～8-3′所示，其中，DP2-A如SEQ ID NO：6所示，DP2-B如SEQ ID NO：7所示，DP2-C如SEQ ID NO：8所示；

CP3如5′-NH₂-SEQ ID NO：9-3′所示，DP3如5′-SEQ ID NO：10～12-3′所示，其中，DP3-A如SEQ ID NO：10所示，DP3-B如SEQ ID NO：11所示，DP3-C如SEQ ID NO：12所示；

CP4如5′-NH₂-SEQ ID NO：13-3′所示，DP4如5′-SEQ ID NO：14～16-3′所示，其中，DP4-A如SEQ ID NO：14所示，DP4-B如SEQ ID NO：15所示，DP4-C如SEQ ID NO：16所示。

3.根据权利要求1所述的用于生物芯片检测金黄色葡萄球菌的探针组序列，其特征在于：RCP序列如5′-SEQ ID NO：17-3′所示。

4.根据权利要求1所述的用于生物芯片检测金黄色葡萄球菌的探针组序列，其特征在于：每个CP和DP-A探针序列与金黄色葡萄球菌基因组gDNA序列互补；CP和DP-A探针序列在金黄色葡萄球菌基因组gDNA序列存在时，在T4连接酶作用下连接。

5.根据权利要求1所述的用于生物芯片检测金黄色葡萄球菌的探针组序列，其特征在于：每个CP特异性探针5′端修饰有氨基，5′端添加7个T碱基，作为探针与基片的连接区。

6.根据权利要求1所述的用于生物芯片检测金黄色葡萄球菌的探针组序列，其特征在于：DP-A序列与金黄色葡萄球菌基因组gDNA序列互补，检测时DP-A和gDNA结合；DP-B是DP-A和DP-C的连接区；DP-C序列与滚环探针RCP的5′端和3′端序列互补，也是滚环探针RCP的引物和连接区。

7.根据权利要求1所述的用于生物芯片检测金黄色葡萄球菌的探针组序列，其特征在于：DP-B、DP-C及RCP不含金黄色葡萄球菌gDNA序列。

8.根据权利要求1所述的用于生物芯片检测金黄色葡萄球菌的探针组序列，其特征在于：探针组还包括阴性对照探针NC和阳性对照探针PC，NC和PC序列不含有与金黄色葡萄球菌gDNA序列互补的序列；NC和PC的5′端修饰氨基，PC的3′端修饰biotin；NC和PC的5′端添加11个T碱基；阴性对照探针NC和阳性对照探针PC序列分别如5′-SEQ ID NO：18-biotin-3′和5′-SEQ ID NO：19-3′所示。

9.根据权利要求1至8任一所述的用于生物芯片检测金黄色葡萄球菌的探针组序列，其特征在于：在制备用于生物芯片检测金黄色葡萄球菌产品中的应用。

10.根据权利要求9所述的用于生物芯片检测金黄色葡萄球菌的探针组序列，其特征在于：所述探针组序列用于金黄色葡萄球菌生物芯片检测方法，包括以下步骤：

[1]、将硅烷化处理的玻片用5％的戊二醛处理，然后依次用丙酮、乙醇、去离子蒸馏水彻底清洗，干燥后得到醛基修饰的玻片；

[2]、将经5′-氨基修饰的CP点样在第1步制备的玻片表面，点样的微阵列经水化和NaIO₄还原处理后，制备成CP微阵列；

[3]、将DP、RCP和金黄色葡萄球菌基因组gDNA混合变性后加入到制备的微阵列上退火并连接；

[4]、对退火的微阵列经洗脱后，在芯片表面的基因结构中加入滚环扩增RCA反应体系物，进行在片滚环扩增RCA并引入biotin-dUTP，经扩增和洗涤后，加入链亲和素与RCA扩增产物结合；

[5]、经洗脱，外荧光成像仪扫描芯片，获得检测结果：如果“靶”微生物存在，CP和DP通过T4DNA连接酶连接，在片滚环扩增RCA进行，则有荧光信号产生；如果“靶”微生物不存在，则无荧光信号产生。