[发明专利]一种基于纳米抗体检测二乙氧基有机磷农药的酶联免疫试剂盒及其使用方法

说明书

本发明公开一种基于纳米抗体检测二乙氧基有机磷农药的酶联免疫试剂盒及其使用方法。该免疫试剂盒含有纳米抗体作为检测抗体，纳米抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。所述试剂盒为ELISA试剂盒，该试剂盒还包括：包被含有机磷农药抗原的酶标板、辣根过氧化物酶标记的二抗溶液、二乙氧基有机磷农药标准溶液、底物液、底物缓冲液、终止液、浓缩洗涤液。本发明的二乙氧基有机磷农药纳米抗体表达量高、稳定性强，该试剂盒能够检测多种二乙氧基有机磷农药，能够广谱特异性识别二乙氧基有机磷农药，且检测结果准确、效果好、稳定性好；且具有操作简单、灵敏度高、价格低廉等优势，能准确地检测农产品中二乙氧基有机磷农药的残留。

技术领域

本发明涉及二乙氧基有机磷农药检测技术领域，更具体地，涉及一种基于纳米抗体检测二乙氧基有机磷农药的酶联免疫试剂盒及其使用方法。

背景技术

农药对当今的农业丰收高产具有重大意义，正被广泛的用于农作物病虫防治领域。自从20世纪70年代有机磷农药代替有机氯农药后，我国有机磷农药的用量已占农药杀虫剂总量的70％。有机磷农药是一类能够抑制胆碱酶活性的杀虫剂，因其杀虫效果强、适用范围广及价格低廉等优势，被广泛用于农业生产中。尽管近年来我国政府已经加强对农药使用的监管与监测，目前我国农产品的有机磷农药残留现状依旧令人担忧。

我国农产品中有机磷农药残留特点如下：(1)残留现象仍比较严重。主要体现在蔬菜，水果中有机磷农药的检出率和超标率。(2)样品中存在多种有机磷农药残留。发现蔬菜和水样品中同时存在多种有机磷农药，证实有机磷农药混用和乱用的现象。(3)中低毒有机磷农药逐渐替代高毒性有机磷农药。

从2007年开始，我国农业部相继禁止了高毒性有机磷农药如甲胺磷、对硫磷、甲基对硫磷、久效磷和磷胺的使用和销售。但目前在许多蔬菜样品中仍有检测到如甲胺磷、对硫磷和甲基对硫磷等的残留。一些中低毒性的有机磷农药(如毒死蜱、三唑磷等)作为替代品开始广泛用于农业生产，在农产品和环境样品中都相继被检出。综上所述：目前我国农产品中有机磷农药残留现象依然比较严重，多残留现象明显，加强对有机磷农药的监测和检测十分必要。

有机磷农药残留检测技术方法较多，主要包括仪器法、酶抑制法、免疫分析法。仪器法虽然准确性高，但仪器价格昂贵，检测成本高，不具备普适性；酶抑制法中的酶制剂容易失活；基于抗体建立的免疫分析方法，具有快速、灵敏、高通量的优势，但是抗体在极端条件下往往稳定性差，容易失活。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术的不足，从抗二乙氧基有机磷农药噬菌体展示纳米抗体库获得表达量高、稳定性强的二乙氧基有机磷农药纳米抗体，创制二乙氧基有机磷农药检测试剂盒。

本发明的第一个目的是提供一种检测二乙氧基有机磷农药残留的免疫学试剂盒。

本发明的第二个目的是提供所述试剂盒在检测二乙氧基有机磷农药中的应用。

本发明的第三个目的是提供所述试剂盒的使用方法。

为了实现上述目的，本发明是通过以下技术方案予以实现的：

一种检测二乙氧基有机磷农药残留的免疫学试剂盒，所述试剂盒中含有纳米抗体作为检测抗体，纳米抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

所述试剂盒中含有纳米抗体核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

优选地，所述试剂盒为ELISA试剂盒，该试剂盒还还包括：包被含二乙氧基有机磷农药抗原的酶标板、辣根过氧化物酶标记的二抗溶液、二乙氧基有机磷农药标准溶液、底物液、底物缓冲液、终止液、浓缩洗涤液。

优选地，所述纳米抗体的浓度为800～900ng/ml。

更优选地，所述纳米抗体的浓度为850ng/ml。