[发明专利]抗体细胞工程株构建及工艺优化在审
| 申请号： | 201810230200.4 | 申请日： | 2018-03-20 |
| 公开（公告）号： | CN108504684A | 公开（公告）日： | 2018-09-07 |
| 发明（设计）人： | 汪国兴;武婷;樊丽 | 申请（专利权）人： | 安徽瀚海博兴生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/65 |
| 代理公司： | 上海精晟知识产权代理有限公司 31253 | 代理人： | 冯子玲 |
| 地址： | 230000 安徽省合肥市高新*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 构建 目的基因 抗体 转染 工艺优化 宿主细胞 细胞工程 重组细胞 双顺反子载体 细胞工程技术 工作细胞库 单顺反子 反式互补 主细胞库 转染技术 转染效率 基因组 拷贝数 整合 克隆 筛选 | ||
1.抗体细胞工程株构建及工艺优化，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一：选用生长特性良好，无血清悬浮培养密度高(1～2X107cell/ml),异源蛋白表达能力强(20～70pg/cell/day)，具备正确翻译后修饰能力的宿主细胞；
步骤二：筛选出目的基因和筛选出标记(Dhfr、GS，或其他抗体基因)的质粒转染至宿主细胞；
步骤三：将感染的宿主细胞，放入相同的条件的培养基进行培养，并筛选出重组细胞；
步骤四：得到的筛选细胞经过克隆、悬浮、无血清驯化后，在反应器中对其的生长能力、表达水平进行分析评测；
步骤五：选取出具有产业价值的重组细胞系进行冰冻保存，建立符合cGMP要求的主细胞库、工作细胞库。
2.根据权利要求1所述的抗体细胞工程株构建及工艺优化，其特征在于，所述步骤一中宿主细胞遗传背景清晰、表型稳定。
3.根据权利要求1所述的抗体细胞工程株构建及工艺优化，其特征在于，所述步骤一中提高宿主细胞的翻译后修饰能力通过目的蛋白生物合成的分子伴侣进行遗传操作。
4.根据权利要求1所述的抗体细胞工程株构建及工艺优化，其特征在于，所述步骤二中其他抗体基因包括neo、hygro。
5.根据权利要求1所述的抗体细胞工程株构建及工艺优化，其特征在于，所述步骤四中细胞过度表达通过E1B-19K、Aven基因或热激蛋白、牛磺酸转运蛋白，提高细胞活性、延长培养周期。
6.根据权利要求4所述的抗体细胞工程株构建及工艺优化，其特征在于，所述Aven基因为凋亡抑制基因。
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