[发明专利]抗体细胞工程株构建及工艺优化

说明书

本发明公开了一种抗体细胞工程株构建及工艺优化。涉及细胞工程技术领域。包括宿主细胞选择、目的基因的转染、重组细胞的筛选、重组细胞克隆、主细胞库和工作细胞库的构建。本发明通过抗体的转染的过程中构建的载体包括如下三种单顺反子载体、双顺反子载体、反式互补载体；转染技术由于目的基因不需要整合到宿主细胞的基因组中，目的基因的拷贝数和转染效率均稳定转染明显提高。

技术领域

本发明属于细胞工程技术领域，特别是涉及一种抗体细胞工程株构建及工艺优化。

背景技术

动物细胞工程学是指以动物细胞或其组成成分为研究对象，对细胞或其组分进行操作、加工或改造，使其按照人的意图发生结构或功能等生物学特性的改变，获得人类所需的生物产品或创造新的动物品种的一门综合性技术科学。

现有的动物细胞工程目的基因的载体构建及目的基因的重组过程繁琐，重组细胞的克隆过程耗时长。

发明内容

本发明的目的在于提供抗体细胞工程株构建及工艺优化，抗体的转染的过程中构建的载体包括如下三种单顺反子载体、双顺反子载体、反式互补载体；转染技术由于目的基因不需要整合到宿主细胞的基因组中，目的基因的拷贝数和转染效率均稳定转染明显提高。

为解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明为抗体细胞工程株构建及工艺优化，包括如下步骤：

步骤一：选用生长特性良好，无血清悬浮培养密度高(1～2X107cell/ml),异源蛋白表达能力强(20～70pg/cell/day)，具备正确翻译后修饰能力的宿主细胞；

步骤二：筛选出目的基因和筛选出标记(Dhfr、GS，或其他抗体基因)的质粒转染至宿主细胞；

步骤三：将感染的宿主细胞，放入相同的条件的培养基进行培养，并筛选出重组细胞；

步骤四：得到的筛选细胞经过克隆、悬浮、无血清驯化后，在反应器中对其的生长能力、表达水平进行分析评测；

步骤五：选取出具有产业价值的重组细胞系进行冰冻保存，建立符合cGMP要求的主细胞库、工作细胞库。

进一步地，所述步骤一中宿主细胞遗传背景清晰、表型稳定。

进一步地，所述步骤一中提高宿主细胞的翻译后修饰能力通过目的蛋白生物合成的分子伴侣进行遗传操作。

进一步地，所述步骤二中其他抗体基因包括neo、hygro。

进一步地，所述步骤四中细胞过度表达通过E1B-19K、Aven基因或热激蛋白、牛磺酸转运蛋白，提高细胞活性、延长培养周期。

进一步地，所述Aven基因为凋亡抑制基因。

本发明具有以下有益效果：

1、本发明抗体的转染的过程中构建的载体包括如下三种单顺反子载体、双顺反子载体、反式互补载体；转染技术由于目的基因不需要整合到宿主细胞的基因组中，目的基因的拷贝数和转染效率均稳定转染明显提高。

2、本发明克隆筛选环节需要筛选出重组细胞并将其单克隆化，传统的有限稀释法耗时、费力，往往是稳定细胞系钩尖的限速步骤；借助流式细胞仪进行细胞分选，或使用自动机器挑克隆，都能显著提高克隆筛选的通量和效率。

当然，实施本发明的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有优点。

具体实施方式

本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。