[发明专利]一种鸡白痢染色凝集抗原及其制备方法

权利要求书

1.一种鸡白痢染色凝集抗原，其特征在于，由鸡白痢沙门氏菌菌种S0808、C79-6、C79-11-S11和SP8441制成，所述鸡白痢沙门氏菌菌种S0808、C79-6、C79-11-S11和SP8441均在中国典型培养物保藏中心保藏。

2.根据权利要求1所述的一种鸡白痢染色凝集抗原，其特征在于，所述鸡白痢染色凝集抗原含有的细胞浓度为1.5×10¹⁰CFU/ml，且其中鸡白痢沙门氏菌菌种S0808、C79-6、C79-11-S11和SP8441的细胞数量分别为15%、25%、55%和5%。

3.一种鸡白痢染色凝集抗原的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：将鸡白痢沙门氏菌菌种S0808、C79-6、C79-11-S11和SP8441分别利用营养肉汤培养基进行复苏繁殖，营养肉汤培养基的培养时间设置为20-23h，得到鸡白痢沙门氏菌菌种S0808、C79-6、C79-11-S11和SP8441所对应的培养液；

S2：S1中所述的四种不同的培养液分别接种在SS琼脂培养基中，SS琼脂培养基所接种的培养液均在恒温箱的内部放置44-46h，且恒温箱内部的温度设置为38-40℃；

S3：S2中所述的SS琼脂培养基分别利用生理盐水洗下菌苔，得到一级种子液，然后一级种子液利用紫外线照射灯，在34-36℃下进行照射10-20min；

S4：S3中所述的一级种子液分别接种在SS琼脂培养基中，SS琼脂培养基所接种的培养液均在恒温箱的内部放置44-46h，且恒温箱内部的温度设置为38-40℃；

S5：S4中所述的SS琼脂培养基分别利用盐酸生理盐水洗下菌苔，并利用盐酸进行酸化处理，得到二级种子液，并置于无菌瓶中，无菌瓶放置到30-32℃的水中，且放置时间设置为20-25min，最后将无菌瓶外侧的水迹进行擦拭干净；

S6：利用光学显微镜对S5中所述的无菌瓶中的二级种子液进行观察，筛选出内部暂无杂菌的无菌瓶；

S7：S6中所述的无菌瓶所放置的二级种子液放置到除菌箱中，除菌箱利用其内部的氦氖激光器对无菌瓶所放置的二级种子液进行2-4次照射，且氦氖激光器的每次照射时间均设置为25-30min，得到灭菌的二级种子液；

S8：S7中所述的经过灭菌处理的二级种子液在冰箱的内部放置21-23h，且冰箱的内部温度设置为2-4℃，得到灭活的二级种子液；

S9：S8中所述的二级种子液利用离心设备去除上清液，得到悬浮的菌泥，然后菌泥利用生理盐水通过浊法配置成1.5×10¹⁰CFU/ml的菌液；

S10：S9中所述的菌液同时加入革兰氏染液和石碳酸复红染液进行染色，然后加入染液后的菌液进行摇匀，最后在35℃的恒温箱内进行放置44-46h，得到染色抗原；

S11：S10中的分别对应鸡白痢沙门氏菌菌种S0808、C79-6、C79-11-S11和SP8441的染色抗原按照以下质量比例混合：鸡白痢沙门氏菌菌种S0808为15%、鸡白痢沙门氏菌菌种C79-6为25%、鸡白痢沙门氏菌菌种C79-11-S11为55%、鸡白痢沙门氏菌菌种SP8441为5%，混合后的染色抗原利用转速为3500-4500r/min的离心设备进行均匀摇晃，且离心设备的离心时间设置为20-40min，得到鸡白痢染色凝集抗原。

4.根据权利要求3所述的一种鸡白痢染色凝集抗原的制备方法，其特征在于，所述S1中，营养肉汤培养基为改良性马丁肉汤，营养肉汤培养基的PH值为6.5-6.8，营养肉汤培养基放置于干燥箱中，且干燥箱的内部温度设置为38-40℃。

5.根据权利要求3所述的一种鸡白痢染色凝集抗原的制备方法，其特征在于，所述S2中，恒温箱的最佳放置时间为45h，且恒温箱的最佳内部温度设置为39℃。

6.根据权利要求3所述的一种鸡白痢染色凝集抗原的制备方法，其特征在于，所述S3中，生理盐水均为0.4-0.6%浓度的福尔马林生理盐水。