[发明专利]一种致敏胶乳的制备方法及试剂盒

权利要求书

1.一种致敏胶乳的制备方法，其步骤是：

（1）准备：准备60-300nm的聚苯乙烯胶乳微球，胶乳微球用pH6.0的50mM 2-（N-吗啡啉）乙磺酸稀释至终浓度为1-3%w/v得到胶乳微球溶液；EDC用pH6.0的50mM 2-（N-吗啡啉）乙磺酸溶解，得到浓度为0.01g/mL的EDC溶液；

（2）活化：以胶乳微球的重量为计，每mg微球按10-100μL EDC溶液的比例滴加到胶乳微球溶液中，震荡混匀，10-37℃震荡活化20-30min，震荡速度为50-200rpm，得到活化的胶乳微球；

其特征在于：

（3）换液：将活化的胶乳微球倒入切向流过滤系统的样品容器中，将偶联缓冲液倒入清洗液容器中，在仪器上设置目标泵速为30-60mL、跨膜压力为2.5Psi、剪切力为2000-4000s^-1，参数设置完成后按开始键进行过滤，偶联缓冲液的体积为待过滤胶乳微球体积的3-6倍，按结束键停止过滤，整个过程控制在1h之内；

（4）偶联：以胶乳微球的重量为计，按微球：抗体=0.1-0.5%的比例将抗体加入到步骤（3）得到的溶液中，震荡混匀，10-37℃震荡偶联2-3h，震荡速度为50-200rpm；

（5）封闭：按溶液的终体积为0.5-2%的比例将5%牛血清白蛋白母液加入到步骤（4）得到的溶液中，震荡混匀，10-37℃震荡封闭1-2h，震荡速度为50-200rpm；

（6）清洗换液：将步骤（5）得到的溶液倒入切向流过滤系统的样品容器中，将储存缓冲液倒入清洗液容器中，在仪器上设置目标泵速为30-60mL/min、跨膜压力为2.5Psi、剪切力为2000-4000s^-1，参数设置完成后按开始键进行过滤，储存缓冲液的体积为待过滤胶乳微球体积的3-6倍，按结束键停止过滤，即得到致敏胶乳。

2.根据权利要求1所述的致敏胶乳的制备方法，其特征在于：偶联缓冲液为50-200mM磷酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、MES缓冲液中的一种，pH在6-10之间。

3.根据权利要求1所述的致敏胶乳的制备方法，其特征在于：抗体为单克隆抗体和多克隆抗体中的一种。

4.根据权利要求1所述的致敏胶乳的制备方法，其特征在于：储存缓冲液为20-100mM磷酸盐缓冲液、HEPES缓冲液、甘氨酸缓冲液、Tris缓冲液、PIPES缓冲液、柠檬酸缓冲液中的一种，pH在6-10之间；在储存缓冲液中加入稳定剂。

5.根据权利要求4所述的致敏胶乳的制备方法，其特征在于：稳定剂为1-5%的甘油、蔗糖、甘露醇、海藻糖中的一种或者多种。

6.含有权利要求1所述的致敏胶乳的检测试剂盒，其特征在于：

包括R1试剂和R2试剂，其中R1试剂包括缓冲液、一价或二价盐、表面活性剂、PEG和叠氮钠；R2试剂为致敏胶乳。

7.根据权利要求6所述的检测试剂盒，其特征在于：R1试剂中的缓冲液为Tris、磷酸盐、碳酸盐缓冲液中的一种，浓度为20-500mM。

8.根据权利要求6所述的检测试剂盒，其特征在于：一价或二价盐为氯化钠、氯化钾、氯化钙、氯化镁中的一种或多种组成，浓度为0.1-15g/L。

9.根据权利要求6所述的检测试剂盒，其特征在于：表面活性剂为吐温系列、曲拉通系列中的一种，浓度为1-10mL/L。