[发明专利]一种微生物转化法制备达木林A的方法

权利要求书

1.一种微生物转化法制备达木林A的方法，其特征在于，包括通过如下步骤：

步骤S1，孢子和种子制备：将短刺小克银汉霉AS3.153菌株接种于斜面培养基上，置于28℃恒温培养7d，得到菌丝生长旺盛、孢子丰富的培养物；取适量孢子接入种子瓶，于28℃振荡培养24h，得到种子培养物；

步骤S2，微生物转化：以5%的接种量将种子培养物转至转化瓶，28℃振荡预培养24h后加入绞股蓝皂苷LI无菌水溶液，使绞股蓝皂苷LI终浓度为0.2g/L，28℃振荡培养96h；

步骤S3，转化产物收集：取转化培养物上清液，用乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯萃取液，浓缩得到转化产物粗品；

步骤S4，将转化产物粗品上样于正相硅胶柱，硅胶径高比为1:10，拌样硅胶占硅胶总量的1/10，干法装柱，拌硅胶上样；依次用体积比为40:1:2、20:1:2的二氯甲烷/甲醇/丙酮混合溶剂以12BV/h的速度梯度洗脱，分别洗脱8BV、10BV；收集20:1:2二氯甲烷/甲醇/丙酮洗脱9-10BV的洗脱液，浓缩干燥得到达木林A。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：斜面培养基为马铃薯蔗糖琼脂培养基，成分为：蔗糖1.5g，琼脂2.0g，马铃薯20g和蒸馏水100ml。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：种子瓶和转化瓶培养基成分为：葡萄糖2.0g，酵母膏0.5g，蛋白胨0.5g，氯化钠0.5g，磷酸氢二钾0.5g和蒸馏水100ml，pH调至8.3。

4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于：培养基均于115℃灭菌30min后使用。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤S1中，短刺小克银汉霉AS3.153菌株接种于斜面培养基之前于4℃保存。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤S1中，用无菌接种环取一环富含孢子的菌丝体，仅将孢子接入种子瓶中。