[发明专利]一种检测动物源性成分的方法

权利要求书

1.一种检测动物源性成分的方法，其特征在于，其包括：对待测样本的DNA进行PCR扩增反应；

所述PCR扩增反应的PCR反应体系中含有如下引物对中的一种或多种的组合：

包括SEQ ID NO.1所示的上游引物和SEQ ID NO.2所示的下游引物的用于检测猪源性成分的第一引物对；

包括SEQ ID NO.3所示的上游引物和SEQ ID NO.4所示的下游引物的用于检测羊源性成分的第二引物对；

包括SEQ ID NO.5所示的上游引物和SEQ ID NO.6所示的下游引物的用于检测驴源性成分的第三引物对；

包括SEQ ID NO.7所示的上游引物和SEQ ID NO.8所示的下游引物的用于检测鼠源性成分的第四引物对；

包括SEQ ID NO.9所示的上游引物和SEQ ID NO.10所示的下游引物的用于检测牦牛源性成分的第五引物对；

各引物对中的上游引物的5’端或下游引物的5’端标记有用于与催化酶结合的第一亲和物。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在PCR反应体系中，各引物对的上游引物与下游引物的摩尔比大于1，或者各引物对的下游引物与上游引物的摩尔比大于1。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，在PCR反应体系中，各引物对的上游引物与下游引物的摩尔比为1.1-1.5，或者各引物对的下游引物与上游引物的摩尔比为1.1-1.5。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于，在所述PCR扩增反应之后，所述方法还包括：杂交步骤；

所述杂交步骤包括：将由所述PCR扩增反应得到的PCR反应产物与膜芯片反应，进行杂交处理；

其中，所述膜芯片上固定有碱基序列如SEQ ID NO.11-15所示的探针中的一种或多种。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述杂交处理的条件包括：温度为44-46℃、转速为80-100rpm以及时间为40-50min。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，在进行杂交处理之前，所述杂交步骤还包括去活化处理；

所述去活化处理包括：

用去活化液对所述膜芯片进行孵育，36-38℃孵育8-10min；然后用去活化清洗液对所述膜芯片进行孵育，58-62℃孵育4-6min。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述去活化液为：NaOH溶液；

所述去活化液为：90-110mmol/L的NaOH溶液；

优选的，所述去活化清洗液为：含0.8％-0.12％SDS的SSPE缓冲液。

8.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，在进行杂交处理之后，所述杂交步骤还包括酶孵育处理；

所述酶孵育处理包括：将含有所述催化酶的酶孵育液与所述膜芯片接触，在温度为40-44℃、转速为80-100rpm条件下震荡孵育28-32min；

所述催化酶标记有用于与所述第一亲和物特异性结合的第二亲和物。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述第一亲和物选自地高辛、异硫氰酸荧光素和生物素中的任意一种；

所述第二亲和物选自地高辛抗体、异硫氰酸荧光素抗体和链霉亲和素；

优选的，所述催化酶选自辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶和葡萄糖氧化酶中的任意一种。

10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，在进行酶孵育处理之后，所述杂交步骤还包括显色处理；

所述显色处理包括：将显色液与所述膜芯片接触，静置5-20min

其中，所述显色液含有所述催化酶的底物。