[发明专利]用于检测丁酰胆碱酯酶的荧光探针及其应用

说明书

本发明提供了一种用于检测丁酰胆碱酯酶活性的荧光探针，所述荧光探针为非肽类荧光探针，且所述非肽类荧光探针的结构如下式1所示：

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种用于检测丁酰胆碱酯酶的荧光探针及其应用。

背景技术

丁酰胆碱酯酶(BChE)是存在于生物体内的一种乙酰胆碱同工酶，它是由肝脏合成的一种非特异性酯酶，由于该酶在肝脏中合成后立即释放到血浆中，因此，血清中BChE活性是测定肝细胞蛋白质合成功能的灵敏指标。随着检测技术和临床诊疗水平的不断提高，丁酰胆碱酯酶除了用于评估肝脏储备功能，还扩展到恶性肿瘤、神经系统性疾病、心血管疾病、代谢综合症等众多疾病的检测和诊断领域当中。现有测定丁酰胆碱酯酶活性的方法主要有两种。第一种是毒剂和蛋白质加合物的分析检测，主要是通过质谱分析手段来检测神经性毒剂(GB,GD和VX)与血浆中的丁酰胆碱酯酶结合形成的加合产物来达到检测目的。第二种方法则是氟离子重活化法，主要是神经性毒剂将丁酰胆碱酯酶磷酰化，再与氟离子作用后，神经性毒剂的磷酸基部分可以从胆碱醋酶中释放出来，而再生的有机氟磷酸酯可以用GC、GC-MS等手段进行检测，同时也可以利用大体积进样技术来测定低浓度的再生有机氟磷酸酯。以上两种方法不仅操作过程较为复杂，均需要昂贵的大型仪器与检测费用才能实现，而且只能用于多肽类荧光探针的检测。由于多肽类荧光探针存在稳定性差、储运条件苛刻、原子利用率低、荧光强度弱等缺点，因此，设计开发基于非肽类的荧光探针及其检测方法，显得十分迫切和重要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于检测丁酰胆碱酯酶的荧光探针及其应用，旨在解决本发明的目的在于克服现有技术中丁酰胆碱酯酶的检测方法需要依赖昂贵的大型仪器设备、且检测过程复杂的问题，而多肽类荧光探针存在稳定性差、储运条件苛刻、原子利用率低、荧光强度弱的问题。

为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

本发明一方面提供一种用于检测丁酰胆碱酯酶活性的荧光探针，所述荧光探针为非肽类荧光探针，且所述非肽类荧光探针的结构如下式1所示：

本发明另一方面提供一种检测丁酰胆碱酯酶活性的试剂盒，包括如上述非肽类荧光探针和丁酰胆碱酯酶的标准品。

本发明再一方面提供一种检测丁酰胆碱酯酶活性的试剂盒的使用方法，包括以下步骤：

提供丁酰胆碱酯酶标准品、丁酰胆碱酯酶待测样品和非肽类荧光探针；

将所述丁酰胆碱酯酶标准品和所述非肽类荧光探针混合反应，得到荧光团反应产物；检测激发光刺激下的反应产物的荧光强度变化值随时间的变化值，获取丁酰胆碱酯酶-荧光强度变化值标准曲线，得到丁酰胆碱酯酶-荧光强度变化值线性方程；

在与所述丁酰胆碱酯酶标准品相同的检测条件下，将所述丁酰胆碱酯酶待测样品和所述非肽类荧光探针混合反应，得到荧光团反应产物；检测激发光刺激下的反应产物的荧光强度变化值，代入所述丁酰胆碱酯酶-荧光强度变化值线性方程中，计算获得所述丁酰胆碱酯酶待测样品的浓度。

以及，本发明还提供一种非肽类荧光探针在丁酰胆碱酯酶检测领域的应用，所述应用包括所述荧光探针用于检测丁酰胆碱酯酶活性，所述荧光探针用于筛选丁酰胆碱酯酶抑制剂或促进剂，所述荧光探针用于丁酰胆碱酯酶抑制剂或促进剂的动力学表征领域的应用。

本发明提供的用于检测丁酰胆碱酯酶活性的荧光探针为非肽类荧光探针，具有稳定性强、原子利用率高、荧光强度高、储运条件灵活的特点。用于检测丁酰胆碱酯酶活性时，丁酰胆碱酯酶待测样品与所述非肽类荧光探针接触后可产生荧光团(Fluorophore)，通过检测荧光团在激发光下发出的荧光的强度，实现丁酰胆碱酯酶活性检测的目的。与现有的多肽类底物荧光探针相比，本发明实施例提供的用于检测丁酰胆碱酯酶活性的非肽类荧光探针具有专一性高和荧光强度变化显著的优点，因此，与所述丁酰胆碱酯酶具有更好的亲和力，检测具有更高的灵敏度，从而能够快速简便、有效地检测丁酰胆碱酯酶活性。