[发明专利]一种生防菌剂及其在防治灰霉病中的应用

权利要求书

1.一种生防菌剂，其特征在于，所述生防菌剂按照如下工艺制备而得：

1）将丝孢酵母划线接种在YPDA培养基上培养，得到单菌落；挑取单菌落接种到YPD液体培养基上培养，30℃培养24h，得到丝孢酵母种子液，待用；

2）将康氏木霉划线接种在PDA培养基上培养，得到单菌落；挑取单菌落接种到PDA液体培养基上培养，30℃、200rpm摇床培养36h，得到康氏木霉种子液，待用；

3）先将康氏木霉种子液按照10-15%的接种量接入到发酵培养基中，30℃培养6小时，然后将丝孢酵母种子液按照5-7%的接种量接入到发酵培养基，继续以30℃培养18小时，得到康氏木霉-丝孢酵母混合发酵液；

4）将施氏假单胞菌在LB平板上划线培养，得到单菌落；挑取单菌落分别接入LB液体培养基上培养，28℃，200r/min的摇床培养24h，制成种子液；然后按照10%的接种量接入到扩大培养基中，28℃培养24h，得到施氏假单胞菌培养液；

5）将康氏木霉-丝孢酵母混合发酵液和施氏假单胞菌培养液按照2-3:1-2的体积比混合均匀，然后真空冷冻干燥制得菌粉，即得；

所述发酵培养基的配方为：玉米秸秆粉16g/L、豆粕10g/L、氯化铵5g/L、磷酸氢二钾2g/L、磷酸二氢钾1g/L、氯化钠0.5g/L、硫酸镁0.1g/L、硫酸亚铁0.01g/L；

所述扩大培养基的配方为：玉米淀粉12g/L、酵母提取物10g/L、氯化钠5g/L、尿素2g/L、磷酸二氢钾0.1g/L、磷酸氢二钾0.1g/L、硫酸亚铁0.01g/L、硫酸锰0.01g/L；

所述施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)为ATCC17588；所述康氏木霉(Trichoderma koningii)为ATCC66766；所述丝孢酵母(Trichosproom sp.)为ATCC201110。

2.根据权利要求1所述的生防菌剂，其特征在于，所述YPD培养基的配方为：葡萄糖20g，蛋白胨20g，酵母提取浸粉10g，补充蒸馏水至1000mL。

3.根据权利要求1所述的生防菌剂，其特征在于，所述YPDA培养基的配方为：葡萄糖20g，蛋白胨20g，酵母提取浸粉10g，琼脂20g ,补充蒸馏水至1000mL。