[发明专利]一种吲哚糖苷类底物及制备方法和在需氧菌群阴道炎检测中的应用

说明书

本发明针对目前现有技术中检测需氧菌阴道炎所存在的缺陷，公开了一种糖供体合成工艺，进而与色原吲哚连接成苷，合成出一种效果较好，灵敏性、稳定性、特异性均较高的吲哚糖苷类底物，依据检验标准，对本发明合成的底物显色性能与市场已有的需氧菌群阴道炎检测的显色性能进行对比检验，证明显色性能优于科马嘉需氧菌群阴道炎检测试剂的显色性能。本发明通过对该吲哚糖苷类显色底物中糖供体合成工艺与连接成苷工艺的创新、提取纯化工艺的创新及应用验证，使得产品各步反应收率有了较大提高，色泽接近白色，减小了底物颜色在鉴定过程中的影响，较大程度提高了需氧菌群阴道炎检测检测灵敏度及检测准确度。

技术领域

本发明涉及阴道炎诊断用显色底物，尤其是涉及一种显色效果好，灵敏度、稳定性和特异性较高的吲哚糖苷类底物，本发明还涉及该底物的制备方法以及在需氧菌群阴道炎检测中的应用。

背景技术

需氧菌群阴道炎（AV）是临床新确定的一种阴道炎，由于与细菌性阴道炎（BV）、滴虫性阴道炎（TV）的病原体不同，故治疗方案和结局也不相同。AV患者的临床症状体征和TV患者极为相似，若不明确诊断，易造成误诊。准确区别这两种阴道炎，在阴道感染的诊疗中具有重要意义。

检测需氧菌阴道炎目前常用的方法是：①细菌鉴定仪法，该法准确度较高，但存在费用昂贵，无法直接上标本及纯菌培养时间长等缺点；②普通培养加生化鉴定法即金标准法：该法特异性较好，但需进行细菌纯培养，鉴定试验繁琐；③分子生物学法即PCR法：该法快速敏感，但假阳性难以排出，对人员和设备要求均较高。

上述检测技术或成本高、或操作繁琐、或设备要求高、或培养时间较长、或灵敏度较低，因此对兼具灵敏度高、特异性好、操作简便、培养时间短等优点的检测方法的开发研究具有重要的市场应用价值。基于此，对具有高灵敏度、不需借助紫外照射观察的可稳定显色的底物合成研究及其应用也具有非常重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种显色效果较好，灵敏性、稳定性、特异性较高的吲哚糖苷类底物，本发明还提供吲哚糖苷类底物的制备方法以及在检测需氧菌群阴道炎中的应用。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：

本发明所述的吲哚糖苷类底物为5-溴-6-氯-3-吲哚基-葡萄糖醛酸钠盐，其结构式为：

；

其中，式中的R1、R2、 R3可以为氢、氯、溴、碘四种元素中任一种，式中的R4可为氢、钠、钾三种元素中任一种。

进一步的，所述R1为氢，R2为溴， R3为氯， R4为钠。

本发明吲哚糖苷类底物的制备方法包括下述步骤：

第一步，将化合物5-溴-6-氯-3-吲哚基-1,3-二乙酸酯在50%硫酸溶液中反应一定时间后，放入冰水中在0℃~4℃条件下搅拌养晶后抽滤，滤饼用纯化水洗涤至中性，干燥后获得化合物5-溴-6-氯-3-吲哚酚-1-乙酸酯备用；

第二步，将化合物葡醛内酯在甲醇钠作用下于甲醇溶液中反应一定时间，减压浓缩除去溶剂，然后在乙酸酐作用下溶解澄清，滴加高氯酸后静置过夜反应，最后将反应液放入冰箱析晶，抽滤、乙醇洗涤滤饼后得到全乙酰化葡萄糖醛酸甲酯备用；

第三步，将第二步得到的全乙酰化葡萄糖醛酸甲酯在DMAPA作用下于乙腈溶液中室温反应一定时间，然后浓缩得到选择性脱去糖环1位乙酰基产物；

第四步，将第三步得到的选择性脱去糖环1位乙酰基产物在DMF中与三氯乙腈反应一定时间，然后饱和食盐水、乙酸乙酯萃取，回收有机相，干燥、硅胶拌样、柱纯化得到化合物三氯乙酰亚胺酯；