[发明专利]一种重组人TSG-6蛋白及其制备方法和在急性炎症性疾病中的应用在审
| 申请号： | 201810251300.5 | 申请日： | 2018-03-26 |
| 公开（公告）号： | CN108530528A | 公开（公告）日： | 2018-09-14 |
| 发明（设计）人： | 王明丽;张文昌 | 申请（专利权）人： | 芜湖天明生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/47 | 分类号： | C07K14/47;C12N15/12;C12N15/70;A61K38/17;A61P31/22 |
| 代理公司： | 合肥天明专利事务所(普通合伙) 34115 | 代理人： | 赵瑜;金凯 |
| 地址： | 241000 安徽省芜湖市*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 蛋白 急性炎症性疾病 菌体 制备 病毒感染小鼠 原核表达载体 大肠杆菌 分子筛纯化 氨基酸序 编码基因 病毒感染 核苷酸序 急性肺炎 扩增培养 离心收获 离心收集 诱导表达 治疗效果 半乳糖 包涵体 宿主菌 异丙基 复性 构建 菌株 裂解 硫代 沉淀 应用 治疗 | ||
1.一种重组人TSG-6蛋白，其特征在于：所述蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO.1。
2.根据权利要求1所述的重组人TSG-6蛋白，其特征在于：所述蛋白的基因编码核苷酸序列为SEQ ID NO.2。
3.权利要求1所述的重组人TSG-6蛋白在急性炎症性疾病中的应用。
4.权利要求1所述的重组人TSG-6蛋白在治疗HCMV病毒感染所致小鼠急性肺炎中的应用。
5.一种权利要求1所述重组人TSG-6蛋白的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括有如下的步骤：
（1）通过HCMV刺激人胚肺成纤维细胞MRC-5，激活TSG-6基因的表达，通过特异性引物获取TSG-6编码基因；
（2）将人TSG-6编码基因连接入表达载体pET-30a中，构建成表达重组质粒；
（3）将构建的表达重组质粒转化宿主菌，构建能表达重组人TSG-6蛋白的重组基因工程菌；
（4）对该重组基因工程菌进行扩增培养，通过0.2mmol/L的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达5小时，离心收集菌体，超声破碎菌体，离心后收集沉淀；
（5）将收集的沉淀通过洗涤、变复性和分子筛过滤最终获得纯化的重组人TSG-6蛋白。
6.根据权利要求5所述的重组人TSG-6蛋白的制备方法，其特征在于，步骤（1）所述的特异性引物为：
上游引物：CATATGATCATCTTAATTTACTTATTTCTCTTGCTATGG
下游引物：CTCGAGTAAGTGGCTAAATCTTCCAGCT。
7.根据权利要求5所述的重组人TSG-6蛋白的制备方法，其特征在于：步骤（3）所述的宿主菌是E.coli BL21(DE3)。
8.根据权利要求5所述的重组人TSG-6蛋白的制备方法，其特征在于，步骤（5）所述的洗涤液为Buffer A：包含50mM Tris、100mM NaCl、2mM尿素和0.1%EDTA，pH8.0。
9.根据权利要求5所述的重组人TSG-6蛋白的制备方法，其特征在于：步骤（5）所述的变性是将洗涤后的沉淀溶解于Buffer B中，所述Buffer B包含50mM Tris、100mM NaCl、8M尿素和1% β-巯基乙醇，pH8.0。
10.根据权利要求5所述的重组人TSG-6蛋白的制备方法，其特征在于：步骤（5）所述的复性是先将蛋白变性液经Buffer C稀释，然后4℃下在Buffer C中透析6小时，再换BufferC透析过夜。
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