[发明专利]一种重组人TSG-6蛋白及其制备方法和在急性炎症性疾病中的应用

说明书

本发明公开了一种重组人TSG‑6蛋白及其制备方法和在急性炎症性疾病中的应用，该重组人TSG‑6的氨基酸序列为SEQ ID NO.1；其编码基因核苷酸序列为SEQ ID NO.2。本发明利用原核表达载体pET30a构建了能够表达重组人TSG‑6蛋白的大肠杆菌BL21(DE3)宿主菌。将该菌株扩增培养，通过异丙基‑β‑D‑硫代半乳糖苷诱导表达，离心收获菌体，裂解菌体后离心收集包涵体沉淀，经过变、复性和分子筛纯化获得重组人TSG‑6蛋白，该蛋白对于HCMV病毒感染小鼠引起的急性肺炎有很好的治疗效果，为病毒感染所致的急性炎症性疾病的治疗提供新的思路。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种重组人TSG-6蛋白、制备方法及其应用，具体涉及原核基因工程菌制备重组人TSG-6蛋白及其在治疗炎症性疾病动物模型中的应用。

背景技术

TSG-6(tumor necrosis factor alpha stimulate gene 6)也称肿瘤坏死因子α刺激基因6，是一种细胞因子。Lee等于上个世纪90年代筛选TNF-α(tumor necrosis factoralpha)刺激人类二倍体FS-4成纤维细胞cDNA表达文库时，首次发现了TSG-6基因。大多数哺乳动物基因组中均有TSG-6基因，其氨基酸序列在不同物种间具有高度同源性。TSG-6蛋白主要表达于软骨细胞、滑膜细胞、单核细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞以及具有分化潜能的干细胞。

人TSG-6基因位于人染色体2q23.3，mRNA全长1439bp，其76-909nt核苷酸编码一个由277个氨基酸残基组成的蛋白，分子量大小约为31kd。主要由相邻的连接组件和CUB组件(CUB module)组成。连接组件位于TSG-6蛋白前体的第37-128氨基酸残基，由两个α螺旋和两个反向平行的β折叠绕着一个疏水核组成，属于连接组件超家族成员，可与透明质酸(hyaluronic acid，HA)、硫酸软骨素、蛋白多糖结合。位于129～250氨基酸残基，结构域高度保守，金属蛋白酶、丝氨酸蛋白酶、甘露糖相关丝氨酸蛋白等也含有这样的结构，可以与蛋白、碳水化合物包括肝磷脂、转化生长因子β超家族成员、胶原、胶原样蛋白等配体结合。

已有的研究显示，TSG-6基因参与多种机体炎症反应应答，作为一种抑炎因子，其主要通过下调炎症因子的表达、减轻细胞外基质病理反应而发挥作用。在机体遭受感染、创伤等侵害时，适度的炎症反应会有利于机体清除病原体，修复损伤。而如果炎症反应持续很长时间，程度剧烈，则会对机体有害。

病毒感染所致的急性炎症反应往往造成多器官的损害。目前临床上治疗病毒性感染疾病的策略主要是使用抗病毒药物，而抗病毒药物发挥作用需要一定的时间，在这一过程中病毒感染引起的急性炎症反应已经发生，机体多脏器会在清除病毒的过程中遭受损伤。怎样才能减轻或者避免炎症反应对机体的损伤是临床急需解决的问题。本发明通过制备重组人TSG-6蛋白，发现其在HCMV病毒感染所致的小鼠急性肺炎模型中能够很好的保护炎症反应对肺组织的损伤。

发明内容

本发明的目的是解决上述现有技术的不足，提供一种重组人TSG-6蛋白及其制备方法和在急性炎症性疾病中的应用。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种重组人TSG-6蛋白，所述蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO.1。

优选地，所述蛋白的基因编码核苷酸序列为SEQ ID NO.2。

上述重组人TSG-6蛋白在急性炎症性疾病中的应用。

上述重组人TSG-6蛋白在治疗HCMV病毒感染所致小鼠急性肺炎中的应用。

一种所述重组人TSG-6蛋白的制备方法，所述的制备方法包括有如下的步骤：

(1)通过HCMV刺激人胚肺成纤维细胞MRC-5，激活TSG-6基因的表达，通过特异性引物获取TSG-6编码基因；