[发明专利]用于龟纹瓢虫多样性分析的SSR引物及应用

说明书

本发明提供一套用于龟纹瓢虫多样性分析的SSR引物，所述SSR引物选自以下19对引物pro444、pro524、pro3422、pro4078、pro3621、pro3595、pro6393、pro8136‑3、pro8823、pro1546、pro1582、pro5238、pro1517、pro1600、pro523、pro322‑2、pro3848、pro5087和pro8461中的至少一个。本发明还提供所述SSR引物在龟纹瓢虫遗传多样性、遗传结构及谱系地理格局分析中的应用。本发明提供的SSR引物具有特异性强、扩增结果稳定、各位点间不存在连锁不平衡现象、多态性高等特征，这些分子标记可应用于龟纹瓢虫种群遗传、系统进化、基因定位、分子鉴定等相关领域。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体地说，涉及用于龟纹瓢虫多样性分析的SSR引物及应用。

背景技术

微卫星DNA(SSR)，即简单序列重复，在整个基因组中分布广泛。同一类型的微卫星序列由于重复次数或重复程度的差异，从而在每个座位上产生多态性。由于微卫星序列的两端具有高的保守性，使特异性引物的设计变得非常方便。该分子标记由于具有高的多态信息含量，呈共显性遗传，可用于种群历史的重现等特性，使其广泛在种群遗传多样性、遗传结构及谱系地理格局研究中应用。

龟纹瓢虫Propylea japonica(Thunberg)属于半翅目瓢虫科(Coleoptera：Coccinellidae)，是一种在我国分布较广的捕食性天敌昆虫，因其具有较强的耐饥饿、抗高温和干旱的能力，同时对田间害虫，例如棉蚜、桃蚜、叶螨等昆虫种类具有较好的防控作用，目前已经成为农业生产中非常具有应用前景的天敌种类之一。现阶段通过对龟纹瓢虫进行田间保护和释放以实现“以虫治虫”的防治方法已经在生物防治过程中发挥了较重要的作用。

关于该种类前期生物学方面的研究主要集中于生物学特性、生态学特性、生物防治、人工饲料饲养等方面，分子方面近年来集中于转录组、功能基因的表达及验证、杀虫剂抗性基因筛选等方面；而关于遗传多样性分析、种群遗传结构研究、相关引物筛选等方面的研究相对较少，因此本发明致力于筛选出扩增效果好、特异性强、扩增特征稳定、多态性好的微卫星引物，为上述遗传研究提供一定的方法基础，从而为尽快的了解和认识龟纹瓢虫种质资源现状，明确有效种群大小，以及龟纹瓢虫的有效保护和合理利用提供重要的分子生物学基础。

发明内容

本发明的目的是提供一套用于龟纹瓢虫多样性分析的SSR引物及应用。

为了实现本发明目的，本发明提供的用于龟纹瓢虫多样性分析的SSR引物，所述SSR引物选自pro444、pro524、pro3422、pro4078、pro3621、pro3595、pro6393、pro8136-3、pro8823、pro1546、pro1582、pro5238、pro1517、pro1600、pro523、pro322-2、pro3848、pro5087和pro8461中的至少一个；各SSR引物的信息如表1所示：

表1

本发明还提供用于龟纹瓢虫多样性分析的SSR引物组合，所述SSR引物组合包括表1中所述的19对SSR引物。

本发明还提供含有表1所述SSR引物或其引物组合的检测试剂或试剂盒。

本发明还提供所述SSR引物单独或组合使用在龟纹瓢虫遗传多样性分析中的应用。包括以下步骤：

1)提取待测样品的基因组DNA；

2)以提取的DNA为模板，利用表1所述SSR引物进行PCR反应；

3)分析PCR扩增产物。

优选地，PCR扩增体系为：2×Taq PCR Master Mix反应缓冲液12.5μL，10μM上、下游引物各1μL，DNA模板1-2μL，无菌水补足至25μL。