[发明专利]一种微环游离型载体高效重编程血液细胞生成iPSC的方法

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种微环游离型载体高效重编程血液细胞生成iPSC的方法。包括如下步骤，S1、从人类血液细胞中抽提单核细胞，通过扩增培养基进行选择性培养，获取红细胞祖细胞；S2、将表达外源重编程因子的微环游离型载体导入S1中获取的红细胞祖细胞；S3、将S2中获取的含有表达外源重编程因子的微环游离型载体的红细胞祖细胞经多能干细胞诱导培养基培养，在无饲养层体系中诱导成重编程中间态细胞；S4、待完全诱导后，更换S3中所述的多能干细胞诱导培养基为多能干细胞培养基维持培养，获得外源重编程因子表达消失且内源多能性基因POU5F1、NANOG、TRA‑1‑60与TRA‑1‑81表达激活的细胞，该细胞即为iPSC。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种微环游离型载体高效重编程血液细胞生成iPSC的方法。

背景技术

2006年，Takahashi和Yamanaka利用逆转录病毒载体将四种转录因子OSKM即八聚体集合转录因子4(octamer-binding transcription factor 4，Oct4)、性别决定区Y框蛋白2(sex determining region Y box protein 2，Sox2)、Kuppel样因子4(kruppel-likefactor 4，Klf4)和C-髓细胞组织增生原癌基因(cellular myelocytomatosis oncogene，c-Myc)转入小鼠成纤维细胞，获得了诱导多能干细胞(induced Pluripotent Stem Cell,iPSC)。签于iPSC在生物学特性上与胚胎干细胞(embryonic stem cells，ESCs)极其相似，而且有效避免了伦理限制和取材困难等问题，在疾病模型、药物筛选、发育生物学研究和细胞治疗等方面具有广阔的应用前景。Yamanaka也因这一开创性的成果而获得了2012年诺贝尔生理学或医学奖。

(Takahashi K1,Yamanaka S.Induction of pluripotent stem cells frommouse embryonic and adult fibroblast cultures by defined factors.Cell.2006；126:663-676).

2007年11月，Yamanaka研究组使用了同样的方法获得了人类诱导多能干细胞hiPSC,同时，威斯康辛大学Thomson研究小组也报道了成功诱导成纤维细胞转化为具有人类胚胎干细胞hESC基本特征的hiPSC，所不同的是他们使用慢病毒作为载体，并在14个候选基因中选择出了POU5F1、SOX2、NANOG、LIN28A等4个基因进行转导。

(Takahashi,K.,et al.Induction of pluripotent stem cells from adulthuman fibroblasts by defined factors.Cell 2007；131(5):861-72.

Yu,J.,et al.，Induced pluripotent stem cell lines derived from humansomatic cells.Science.2007；318:1917-1920)

2009年，中国科学家周琪研究组、高绍荣研究组以及美国Baldwin研究组通过四倍体补偿技术获得了完全由iPSC发育而来的小鼠，证明了iPSC具有与胚胎干细胞同样的发育潜能(Boland,et al.2009；Kang,et al.2009；Zhao,et al.2009)。

(Boland,M.J.,et al.Adult mice generated from induced pluripotent stemcells.Nature 2009；461(7260):91-4.