[发明专利]一种化学发光间接竞争免疫检测铜离子的试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种化学发光间接竞争免疫检测铜离子的试剂盒，其特征在于，包括以下组分：酶标板、铜离子检测完全抗原、铜离子单克隆抗体、酶标二抗、发光底物、封闭液和洗涤液；所述铜离子检测完全抗原包括铜离子、载体蛋白以及将所述铜离子与载体蛋白偶联的螯合剂。

2.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述螯合剂为双功能螯合剂p-SCN-Bn-NOTA；所述载体蛋白为鸡卵白蛋白OVA。

3.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，步骤2)所述铜离子单克隆抗体由细胞株4F12分泌产生，所述细胞株4F12的保藏编号为CCTCC C201670。

4.根据权利要求3所述试剂盒，其特征在于，所述铜离子单克隆抗体的浓度为20～30ng/ml。

5.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述铜离子检测完全抗原的浓度为100～200ng/ml。

6.权利要求1～5任意一项所述试剂盒在检测样品铜离子浓度中的应用。

7.权利要求6所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：

1)将铜离子检测完全抗原包被于酶标板上，封闭液封闭、洗涤液洗涤后获得包被有铜离子检测完全抗原的酶标板，所述铜离子检测完全抗原由螯合剂将铜离子与载体蛋白偶联获得；

2)向所述包被铜离子检测完全抗原的酶标板中加入待检样品和铜离子单克隆抗体进行一抗孵育、第一洗涤后，加入酶标二抗，进行酶标二抗孵育、第二洗涤后获得待发光酶标板，所述待检样品是由样品与螯合剂偶联获得；

3)向所述待发光酶标板中加入发光底物反应、静置后，读取发光信号值B；

4)将所述发光信号值B带入预定的标准曲线线性回归方程计算获得待检样品中铜离子浓度；

所述预定的标准曲线线性回归方程的自变量为铜离子浓度的log10对数，因变量为发光抑制率，所述因变量由式I计算得到，(B₀-B)/B₀×100％式I，B₀为未添加待检样品或未添加标准样品时的发光信号值，B为添加待检样品时的发光信号值。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述标准曲线线性回归方程通过以下方法获得：

用不同梯度浓度的竞争物标准品Cu-NOTA替换步骤2)中的待检样品，按照步骤1)～3)的方法获得发光信号值B，以0ng/ml竞争物标准品的发光信号值为B₀，计算不同梯度浓度竞争物标准品的发光抑制率，以发光抑制率为纵坐标，以Cu²⁺浓度log10对数为横坐标，绘制标准曲线，获得标准曲线线性回归方程。

9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述铜离子检测完全抗原制备过程中铜离子、螯合剂和载体蛋白摩尔比为(75～80):(68～72):1。

10.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述样品包括中草药样品、土壤样品和水样。