[发明专利]一种化学发光间接竞争免疫检测铜离子的试剂盒及其应用

说明书

本发明提供了一种化学发光间接竞争免疫检测铜离子的试剂盒及其应用，属于重金属免疫检测技术领域。所述试剂盒包括以下组分：酶标板、铜离子检测完全抗原、铜离子单克隆抗体、酶标二抗、发光底物、封闭液和洗涤液；所述试剂盒的使用方法：1)将铜离子检测完全抗原包被于酶标板上，封闭、洗涤；2)加入待检样品和铜离子单克隆抗体进行一抗孵育、第一洗涤后，加入酶标二抗，进行酶标二抗孵育、第二洗涤；3)加入发光底物反应、静置后，读取发光信号值B；4)将所述发光信号值B带入标准曲线线性回归方程计算获得待检样品中铜离子浓度。所述试剂盒能够用于不同样品中铜离子浓度的测定，准确度和精密度高、特异性好，测定结果稳定。

技术领域

本发明属于重金属免疫检测技术领域，尤其涉及一种化学发光间接竞争免疫检测铜离子的试剂盒及其应用。

背景技术

重金属在地球上广泛分布，正常情况下不会对人类的生活环境造成危害。但随着城市的急速扩张和工业的快速发展，大量重金属因人为活动以非常态速度进入我们的生活环境，这些重金属及其化合物多有致畸、致癌作用，并且都是蓄积性毒物，通过饮用水或食物链富集等方式严重危害人类及动物的健康。

目前对于环境污染最严重的重金属包括：铅、镉、汞、铬、砷(号称“五毒”)，除此之外，还包括毒性相对较弱的镍、锌、铜、钴、锡、钒等。虽然重金属铜的毒性相对较弱，但是因其在工业、农业及畜牧业的广泛应用，铜污染的危害也越来越多的引起人们的关注。人体摄入过量的铜会引发一系列病变，急性铜中毒可引起胃肠道黏膜刺激症状，如恶心、干呕、腹泻，甚至溶血性贫血，肾功能衰竭、休克、昏迷或死亡。慢性摄入铜过高，可引起呼吸系统疾病，铜粉尘可引起咽痛、咳嗽、咯痰和胸闷气憋，甚至出现尘肺等。另外，铜盐具有一定杀菌效果，所以在饲料中也被广泛使用，但高剂量的铜进入家畜的体内很难被代谢，随着生物累积效应造成家畜中毒死亡，还会通过食用家畜肉制品而直接威胁人类健康。因此，加强食品和环境卫生的重金属铜的监查检测迫在眉睫，意义重大。

传统重金属检测方法多采用物理/化学方法，如原子吸收光谱法(AAS)、原子荧光光谱法(AFS)、电感耦合等离子体光谱分析法(ICP)等，虽然其检测结果准确，可信度高，但需要大型仪器设备和专业人员操作，分析时间长，成本昂贵，有一定时间地点局限性，难以适应突发性的环境污染事件或大规模环境质量筛查检测。现有的重金属铜的检测方法成本高、效率低、准确性欠佳。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种成本低、效率高、准确率高的化学发光间接竞争免疫检测铜离子试剂盒及其应用。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：一种化学发光间接竞争免疫检测铜离子的试剂盒，包括以下组分：酶标板、铜离子检测完全抗原、铜离子单克隆抗体、酶标二抗、发光底物、封闭液和洗涤液；所述铜离子检测完全抗原包括铜离子、载体蛋白以及将所述铜离子与载体蛋白偶联的螯合剂。

优选的，所述螯合剂为双功能螯合剂p-SCN-Bn-NOTA；所述载体蛋白为鸡卵白蛋白OVA。

优选的，所述铜离子单克隆抗体由细胞株4F12分泌产生，所述细胞株4F12的保藏编号为CCTCC C201670。

优选的，所述铜离子单克隆抗体的浓度为20～30ng/ml。

优选的，所述铜离子检测完全抗原的浓度为100～200ng/ml。

本发明还提供了所述试剂盒在检测样品铜离子浓度中的应用。