[发明专利]一种高纯度rhNGF的制备方法

权利要求书

1.一种高纯度rhNGF的制备方法，包括对CHO细胞培养物依次进行疏水作用层析和阳离子交换层析；其特征是：两种方法的层析洗脱操作前，均分别具有清洗步骤：

疏水作用层析洗脱操作前，清除前体；

阳离子交换层析洗脱操作前，清除N端截短及异常变异体。

2.权利要求1所述的方法，每种层析方法的清洗和层析两个阶段中，均设定不同的电导率，具体为：

疏水作用层析：清洗液的电导率高于层析洗脱液的电导率；

阳离子层析：清洗液的电导率高于样品原料的电导率；层析洗脱液的电导率高于清洗液的电导率。

3.权利要求1或2所述的方法，按以下3个步骤进行：

1前处理：将CHO细胞培养物经过柱层析纯化，进行一次或多次；

2在疏水层析柱中清洗和洗脱

2.1清除前体：用“疏水层析清洗液”清洗步骤1的产物，弃去流出的液体；

2.2层析：从流出的洗脱液中得到疏水层析产物；

3在阳离子层析柱中清洗和洗脱

3.1清除N端截短及异常变异体：用“阳离子层析清洗液”清洗步骤2的产物，弃去流出的液体；

3.2层析：从流出的洗脱液中得到rhNGF纯品；

步骤2.1中，所述疏水层析清洗液是醇和NaCl的水溶液，且同时满足以下条件：

①醇的含量低于步骤2.2所用的洗脱液中醇的含量；

②NaCl的含量是200～400mM；

③pH与步骤1所得物质范围相同；

步骤3.1中，所述阳离子层析清洗液是含NaCl的缓冲液。

4.权利要求3所述的方法，步骤2.1采用“动态清洗”方式，即根据步骤1柱层析洗脱产物峰面积线性关系式得出清洗体积，按下式计算：

清洗体积(CV)＝8.5-峰面积/ml树脂/1000。

5.权利要求3所述的方法，步骤2.2中，洗脱液是醇的水溶液，含7％-20％醇；或醇和NaCl的水溶液，含7％-20％醇，0-100mM NaCl。

6.权利要求3所述的方法，步骤3.2中所用的洗脱液，是含NaCl的缓冲液。

7.权利要求6所述的方法，所述NaCl的含量是350～600mM。

8.权利要求3所述的方法，步骤3.2中所用的洗脱液，电导率为35-60ms/cm。

9.权利要求1所述的方法，所用的疏水作用层析介质配基为苯基或丁基；阳离子层析介质的阳离子交换配基为丙磺基。

10.权利要求3所述的方法，操作顺序为：步骤1—步骤3—步骤2。