[发明专利]一种卵巢组织的冻存保护与复苏液

说明书

本发明公开了一种卵巢组织的冻存保护与复苏液，其中，冻存保护液包括Leibovitz L‑15培养基，8‑12V/V％DMSO以及0.5‑2V/V％HSA和/或8‑10V/V％SSS。复苏液包括：80‑90V/V％DPBS，10‑20V/V％FBS和/或10‑20V/V％HSA，0.13mol/L‑0.8mol/L蔗糖。本发明还提供了卵巢组织冻存方法和复苏方法。本发明提供的冻存保护液和复苏保护液配合使用，并采用本发明的方法能够快速高效的冻存卵巢组织，并且能够提高复苏后的卵巢组织活率。

技术领域

本发明属于卵巢组织冷冻保存领域，具体地说，涉及一种卵巢组织的冻存保护与复苏液，进一步的，还涉及卵巢组织的冻存方法和复苏方法。

背景技术

中国每年新发癌症患者430万左右，而癌症患者五年存活率可以高达80-90％以上，70％以上的存活者有迫切的生育需求，但放化疗在挽救癌症患者生命的同时，却导致了70％-100％卵巢功能的损害，使其丧失生育能力，极大地影响患者的身心健康和家庭幸福；由于卵巢功能的极早衰退，导致患者各种慢性病如心血管疾病、糖尿病、骨质疏松、早老性痴呆及早死率明显增高，增加国家巨大的医疗负担。因此，在放化疗前对卵巢功能进行保护非常重要。

目前对生殖力保护的方法有几种：卵子冻存、胚胎冻存和卵巢组织冻存。胚胎冻存为试管婴儿的常规技术，卵子冻存，目前中国限于不孕不育IVF患者取精失败或卵巢过度刺激放弃周期的患者，不适用于青春期前女孩及大多急需放化疗的癌症患者，有很大的局限性。

而卵巢组织冻存与再移植技术是目前国际上最新的、最有前景的生殖力保护方法。在放化疗前取部分卵巢组织经特殊处理冻存起来，待其临床痊愈后移植回体内，不仅可以恢复患者的生育能力，还可以恢复其卵巢的内分泌功能，也是抗衰老的热点话题。在欧美发达国家，卵巢组织冻存与再移植技术已作为常规生殖力保护技术应用了十余年，而在我国尚无活产报道。

为了保证卵巢组织再移植回所有者体内后的活性，卵巢组织的冻存和复苏的试剂和方法至关重要。卵巢组织的冻存和复苏液和方法直接影响再移植后的活性，因此，需要提供一种能够适宜卵巢组织冻存、复苏，提高卵巢组织再移植活性的试剂及其方法。

有鉴于此特提出本发明。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于克服现有技术的不足，提供一种卵巢组织的冻存保护与复苏液，包括冻存保护液和复苏液，能够快速高效的冻存卵巢组织，并且能够提高复苏后的卵巢组织活率。

为解决上述技术问题，本发明采用技术方案的基本构思是：

本发明的第一目的是提供一种卵巢组织的冻存保护与复苏液，包括冻存保护液，所述的冻存保护液包括Leibovitz L-15培养基，8-10V/V％DMSO以及0.5-1.0V/V％HSA或8-10V/V％SSS。

本发明提供的卵巢组织的冻存保护液能够很好的冷冻保存生殖力。冻存保护液中成分简单明确，除了目前尚无法替代的渗透性保护液二甲基亚砜(DMSO)以及基础培养基Leibovitz L-15培养基，还含有SSS或者HSA。其中，HSA的添加浓度非常低，既能够作为渗透性保护液，又能降低副反应。而SSS即血清蛋白替代物含量较高，既能够起到稳定蛋白质的作用，又能够避免血清蛋白的污染问题。

进一步的方案，所述的冻存保护液包括Leibovitz L-15培养基，10V/V％DMSO，1V/V％HSA，

或者冻存保护液包括Leibovitz L-15培养基，10V/V％DMSO，10V/V％SSS。

进一步的方案，所述的冻存保护液还包括牛磺酸，所述的牛磺酸的含量为0.5-5mM；

优选的，牛磺酸的含量为0.5-1mM；更优选的，牛磺酸的含量为0.5mM。