[发明专利]一种砂壳虫的分离与培养技术

权利要求书

1.一种砂壳虫的分离与培养方法，其特征在于，所述的方法包括如下步骤：

1)砂壳虫的野外采集与富集：使用64μm孔径浮游生物网在水体表层进行拖网10min，确保30次以上,每4-5次拖网收集一份富集样品，确保样品在4h内运回实验室；

2)虫体的分离、纯化：将富集的砂壳虫放入培养皿或凹玻片，使用微吸管或移液枪在倒置显微镜或解剖镜下对活体砂壳虫进行逐个挑取，放入超纯水中浸泡5min、冲洗3次以上；

3)虫体的饥饿处理：将分离纯化的砂壳虫虫体放入装有超纯水的培养皿中，室温条件下饥饿2-3天；

4)单细胞培养：将饥饿处理后的砂壳虫虫体转移到预先添加IWS培养基的无菌细胞培养板中，每个培养孔中接入单个虫体，并使用斜生栅藻喂食，在30℃的恒温光照培养箱中进行培养，光照周期12:12h，光照强度2000Lx，培养7-10天转移一次虫体；IWS培养基的组成：使用孔径0.2μm滤膜过滤的原位水，120℃高温高压灭菌的沙粒，直径小于64μm,密度为1×10^5-7ind/L，以斜生栅藻喂食，密度为1×10^7-9ind/L，原位水：沙粒：栅藻体积比为40:2:1。