[发明专利]一种降香种子超低温保存方法

权利要求书

1.一种降香种子超低温保存方法，其特征在于，包括以下步骤：室温下将降香种子用装载液处理，取出后转入玻璃化保护剂中，5~8℃处理20~30min，降温至0℃~ -2℃，降温速度为5~10 ℃/h，再降温至-5℃~ -8℃，保持温度0.5~1 h不变，然后迅速投入液氮进行超低温保存；

所述玻璃化保护剂为：含2.25-2.50 mol·L^-1甘油、2.30-2.42 mol·L^-1乙二醇、1.92-2.10 mol·L^-1二甲基亚砜、0.25-0.50 mol·L^-1海藻糖、0.25-0.50 mol·L^-1绿藻粉、2-3 μmol·L^-1白藜芦醇及0.40-0.50 mol·L^-1蔗糖的MS液体培养基，蒸汽灭菌15-20分钟，室温放置。

2.根据权利要求1所述的降香种子超低温保存方法，其特征在于，室温下将降香种子用装载液处理，取出后转入玻璃化保护剂中，5℃处理30 min，降温至 0℃，降温速度为5 ℃/h，然后再降温至 -5℃，保持温度1h不变，之后迅速投入液氮进行超低温保存。

3.根据权利要求1所述的降香种子超低温保存方法，其特征在于，所述装载液为：含有0.4-0.6 mol·L^-1蔗糖及2-2.5 mol·L^-1甘油的MS液体培养基，蒸汽灭菌15-20分钟，室温放置。

4.根据权利要求1所述的降香种子超低温保存方法，其特征在于，所述降香种子为4 ℃保存的含水量为12.5%～13.5%的种子。

5.根据权利要求1所述的降香种子超低温保存方法，其特征在于，降香种子解冻时将冻存管从液氮中取出，40 ℃水浴解冻2~5 min；用1.2 mol·L^-1蔗糖的MS培养液和纯净水洗涤；将洗涤后的种子接种到含有0.3 mol·L^-1蔗糖的1/2 MS培养基上，25 ~28 ℃条件下发芽培养。