[发明专利]一种基于镉诱导H9-CMS细胞模型的心肌保护药物筛选方法在审
| 申请号： | 201810263374.0 | 申请日： | 2018-03-28 |
| 公开（公告）号： | CN108611393A | 公开（公告）日： | 2018-10-02 |
| 发明（设计）人： | 梁平;沈嘉希;苏俊 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12Q1/02 | 分类号： | C12Q1/02;C12Q1/6883 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 郑海峰 |
| 地址： | 310058 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 细胞模型 心肌保护 心肌细胞 诱导 筛选药物 药物筛选 氯化镉 细胞功能障碍 胚胎干细胞 分子基础 活性降低 人类心肌 体外实验 细胞凋亡 下游信号 诱导培养 研究 升高 验证 发现 细胞 积累 分析 | ||
1.一种基于镉诱导H9-CMS细胞模型的心肌保护药物筛选方法，其特征在于包括如下步骤：
1)将H9胚胎干细胞进行培养，待H9细胞长到培养皿的80％以后，用1640-insulin培养基润洗一次，所述的1640-insulin培养基为1640培养基加B27minus Insulin；然后加入1640-insulin培养基，加入ChIR使其浓度为6μM，过24小时以后在原有培养基上补充1640-insulin培养基；再过24小时换液，加入1640-insulin培养基；24h以后换液，然后加入1640-insulin培养基，加入IWR使其浓度为8μM，24h以后在原有培养基上补充1640-insulin培养基；后续两天每天用1640-insulin培养基换液；最后经过24小时以后换液，加入1640+insulin培养基，所述的1640+insulin培养基为1640培养基加B27Insulin；得到心肌细胞H9-CMS；
2)以向心肌细胞H9-CMS同时添加待筛选药物和氯化镉为筛选组，以向心肌细胞H9-CMS仅添加氯化镉为对照组，不对心肌细胞H9-CMS做处理做空白组，筛选组和对照组处理心肌细胞H9-CMS24小时，其中筛选组和对照组中氯化镉的浓度相同，所述的氯化镉的浓度范围为10μM-100μM；根据TUNEL染色和电生理结果评估待筛选药物。
2.根据权利要求1所述的基于镉诱导H9-CMS细胞模型的心肌保护药物筛选方法，其特征在于所述的1640-insulin培养基中，B27minus Insulin占总培养液总量的2％。
3.根据权利要求1所述的基于镉诱导H9-CMS细胞模型的心肌保护药物筛选方法，其特征在于所述的1640+insulin培养基中，B27Insulin占总培养液总量的2％。
4.根据权利要求1所述的基于镉诱导H9-CMS细胞模型的心肌保护药物筛选方法，其特征在于所述的待筛选药物的添加浓度为其IC50值。
5.根据权利要求1所述的基于镉诱导H9-CMS细胞模型的心肌保护药物筛选方法，其特征在于所述步骤1)中在原有培养基上补充1640-insulin培养基的补充量为原培养基的一半。
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