[发明专利]一种高效植物受体孤雌生殖单倍体筛选方法

权利要求书

1.一种DNA分子，所述DNA分子如序列表的SEQ ID NO：1自5’端第340-5088位核苷酸所示。

2.含有权利要求1所述DNA分子的重组载体。

3.权利要求1所述DNA分子或权利要求2所述的重组载体的应用，为如下（a1）-（a3）中的至少一种：

（a1）孤雌生殖单倍体筛选；

（a2）制备单倍体诱导系；

（a3）双单倍体育种。

4.重组表达载体甲和重组表达载体乙在为如下（a1）-（a3）中的至少一种中的应用：

（a1）孤雌生殖单倍体筛选；

（a2）制备单倍体诱导系；

（a3）双单倍体育种；

所述重组表达载体甲为权利要求2所述的重组载体；

所述重组表达载体乙为能够沉默植物基因组中ZmMTL基因的重组表达载体；

所述重组表达载体乙的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：6所示。

5.一种培育转基因植物的方法，包括如下步骤：将权利要求1所述的DNA分子导入出发植物，得到转基因植物。

6.一种带有双荧光标记的单倍体诱导系的构建方法，包括如下步骤：

（1）按照权利要求5所述的方法培育转基因植物；

（2）从步骤（1）得到的转基因植物中随机选择一个单拷贝单株为父本，以已有的单倍体诱导系为母本进行杂交，在后代中筛选阳性植株；

（3）从步骤（2）得到的阳性植株中随机选择一个单株为母本，以步骤（2）中所述单倍体诱导系为父本进行6-8次回交，筛选阳性植株；

（4）从步骤（3）得到的阳性植株随机选择一个单株自交，得到所述带有双荧光标记的单倍体诱导系；

步骤（2）或步骤（3）中，阳性植株为籽粒胚中表达荧光蛋白eGFP且胚乳中表达荧光蛋白DsRED的植株。

7.一种带有双荧光标记的单倍体诱导系的构建方法，包括如下步骤：

（1）按照权利要求5所述的方法培育转基因植物；

（2）将权利要求4中所述的重组表达载体乙导入出发植物，实现对出发植物中ZmMTL基因的定向编辑，得到ZmMTL基因沉默的转基因株系；

（3）从步骤（1）得到的转基因植物中随机选择一个单拷贝单株为父本，步骤（2）得到的转基因株系中随机选择一个单株为母本，进行杂交，筛选阳性植株；阳性植株满足如下条件：（a1）籽粒胚中表达荧光蛋白eGFP且胚乳中表达荧光蛋白DsRED；（a2）含有ZmMTL基因编辑元件；

（4）从步骤（3）筛选的阳性植株中随机选择一株自交，筛选阳性植株，得到所述带有双荧光标记的单倍体诱导系；阳性植株满足如下条件：（b1）籽粒胚中表达荧光蛋白eGFP且胚乳中表达荧光蛋白DsRED；（b2）ZmMTL基因纯合突变或双等位突变；（b3）无ZmMTL基因编辑元件。