[发明专利]从螺旋藻中萃取藻蓝蛋白的方法

说明书

本发明公开了一种从螺旋藻中萃取藻蓝蛋白的方法，其包括：(1)取新鲜或干燥的螺旋藻的藻体于液氮中研磨形成螺旋藻粉，形成螺旋藻粉悬浊液；(2)向螺旋粉悬浊液中加入木瓜蛋白酶和糖化酶组成的复合酶，弃上清液，获得沉淀物；(3)将步骤(2)中获得的沉淀物分级沉淀，透析除盐，获得盐析剩余物；(4)将盐析剩余物清洗之后加入含三氯乙酸和疏基乙醇的丙酮溶液超声混合后静置，之后经两次离心处理，冷冻干燥沉淀。本发明提供的从螺旋藻中萃取藻蓝蛋白的方法，流程工艺简单，易于规模化生产；相较于传统提取方法，本发明提供的方法藻蓝蛋白的获取率高，所获得的藻蓝蛋白在聚丙烯酰胺凝胶电泳中形成条带数目多，质量高。

技术领域

本发明特别涉及一种从螺旋藻中萃取藻蓝蛋白的方法，属于生物医药技术领域。

背景技术

螺旋藻中包含多种生物活性物质，其中藻胆蛋白在螺旋藻干粉中含量丰富(占15-25,w/w％)，并具有重要的医药、保健、生物工程等方面应用价值。对于我国螺旋藻产业中普遍养殖的钝顶螺旋藻品系而言，其藻胆蛋白成分主要包含藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白，二者在藻胆蛋白中的含量比例约为3：1，其中藻蓝蛋白由于含量上的绝对优势(约占螺旋藻干粉的10-20,w/w％)致使其研究应用更为普遍。藻蓝蛋白不但在保健食品及医药领域具有抗辐射、抗癌、免疫调节、促进造血和延缓衰老等功能，据其纯度的不同更广泛地被应用于荧光探针和天然色素等生物工程、食品科学和精细化工等领域。然而由于螺旋藻藻胆蛋白中的藻蓝蛋白分子和别藻蓝蛋白分子的亚基之间氨基酸序列同源性很高，造成藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白难以分离的技术瓶颈。

目前螺旋藻藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白的分离纯化通常采用羟基磷灰石介质进行层析分离，但存在吸附性弱、洗脱时间长、上样量少等问题，并且还需结合其它多步层析操作如体积排阻层析和离子交换层析等进一步提高藻蓝蛋白纯度。

发明内容

本发明的主要目的在于提供一种从螺旋藻中萃取藻蓝蛋白的方法，以克服现有技术的不足。

为实现前述发明目的，本发明采用的技术方案包括：

本发明实施例提供了一种从螺旋藻中萃取藻蓝蛋白的方法，包括：

(1)取新鲜或干燥的螺旋藻的藻体于液氮中研磨形成螺旋藻粉，并加入螺旋藻粉2-3倍质量的磷酸盐缓冲液形成螺旋藻粉悬浊液；

(2)向所述螺旋粉悬浊液中加入木瓜蛋白酶和糖化酶组成的复合酶，先于pH为4-6、30-45℃水浴超声溶解0.5-1.5h，再95-105℃水浴灭酶0.5-0.8h，然后60-80℃水浴浸提，弃上清液，获得沉淀物；

(3)将步骤(2)中获得的沉淀物采用30-50％的硫酸盐和磷酸盐形成的混合溶液分级沉淀，透析除盐，获得盐析剩余物；

(4)将所述盐析剩余物加-3-0℃去离子水反复清洗2-3次，之后加入含三氯乙酸和疏基乙醇的丙酮溶液超声混合后于-20--10℃静置1-2h，之后以1200-1500r/min的转速进行第一次离心处理20-40min；弃上清液、加入疏基乙醇的丙酮溶液于-20--10℃静置1-2h，之后以1200-1500r/min的转速进行第二次离心处理20-40min，弃上清液、冷冻干燥沉淀；所述沉淀即藻蓝蛋白。

与现有技术相比，本发明的优点包括：本发明提供的从螺旋藻中萃取藻蓝蛋白的方法，流程工艺简单，易于规模化生产；相较于传统提取方法，本发明提供的方法藻蓝蛋白的获取率高，所获得的藻蓝蛋白在聚丙烯酰胺凝胶电泳中形成条带数目多，质量高。

具体实施方式

鉴于现有技术中的不足，本案发明人经长期研究和大量实践，得以提出本发明的技术方案。如下将对该技术方案、其实施过程及原理等作进一步的解释说明。

本发明实施例提供了一种从螺旋藻中萃取藻蓝蛋白的方法，包括：