[发明专利]一种兽用戈那瑞林注射剂的制备方法

权利要求书

1.一种兽用戈那瑞林注射剂的制备方法，包括戈那瑞林的合成、纯化和注射剂的制备，其特征在于：

戈那瑞林的合成步骤如下：

（1-1）第一个氨基酸的偶联

取1mol Rink AM 树脂放置于室温中复温20min，替代度0.9mmol/g；

将复温好的树脂加入反应柱中，用DMF洗涤两次，每次洗涤2min，加入DCM溶胀30min；

加入哌啶溶液脱保护两次，按DMF、MeOH、DCM、DMF顺序洗涤，每次洗涤1.5min；

在第二次脱保护的同时，取1.6mol Fmoc-Gly-OH、1.6mol偶联试剂B，用DMF溶解，冷却至10℃以下，加入2mol偶联试剂A活化5 min，活化后的偶联液加入反应釜中搅拌，于30℃反应1.5h，茚检；茚检合格，抽掉反应液；

加入DMF和2mol 封闭试剂AC₂O溶液，搅拌反应3小时；

（1-2）第二个氨基酸的偶联

重复步骤（1-1）中哌啶溶液脱保护和顺序洗涤，取同量的Fmoc-Pro-OH和偶联试剂进行溶解、搅拌、茚检和抽液；

（1-3）同步骤（1-2）依次偶联第三至第十个氨基酸，分别为Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-His(trt)-OH、PGlu，得到戈那瑞林肽树脂，置于不锈钢托盘吹干；

（1-4）肽树脂的裂解

裂解液（三异丙基硅烷：三氟乙酸：水：乙二硫醇）按比例配置并加入血清瓶中，冷却；将戈那瑞林肽树脂加入裂解液，磁力搅拌反应2.5h，抽滤，除渣，得滤液；将滤液加入无水乙醚中静置20min，离心洗涤，得粗肽，烘干；

戈那瑞林粗肽的纯化步骤如下：

戈那瑞林粗肽通过洗脱、转盐、浓缩、冻干得到纯化；

戈那瑞林注射剂的制备步骤如下：

对注射剂瓶洗涤、干燥，对瓶塞清洗、灭菌、干燥；取戈那瑞林、甘露醇、右旋糖酐20溶解于配料罐中30℃以下的注射用水，搅拌混匀，用净化压缩空气压滤，半压塞灌装；冻干；开液压泵，真空压塞；轧盖，目检，包装。

2.根据权利要求1所述的一种兽用戈那瑞林注射剂的制备方法，其特征在于：

戈那瑞林粗肽的纯化步骤中，戈那瑞林粗肽用重量比各为50%的乙腈和醋酸溶液洗脱，分段收集，起峰时开始收集，纯度大于96%为峰顶；醋酸溶液的浓度为0.18%。

3.根据权利要求2所述的一种兽用戈那瑞林注射剂的制备方法，其特征在于：

戈那瑞林粗肽的纯化步骤中，经洗脱的戈那瑞林用32℃旋蒸，去除乙腈并浓缩至30~70mg/ml。

4.根据权利要求1所述的一种兽用戈那瑞林注射剂的制备方法，其特征在于：

戈那瑞林注射剂的制备步骤中，所述注射剂瓶放置在网带上，经清洗后，在300℃高温烘道干燥、灭菌，放入灌封间；所述瓶塞为胶型材料制作，胶塞经自动进料、纯化水粗洗3min，纯化水漂洗8min，喷淋冲洗5min、注射用水精洗8min、121℃蒸汽灭菌20min后，真空干燥，降温，出料。

5.根据权利要求1或4所述的一种兽用戈那瑞林注射剂的制备方法，其特征在于：

戈那瑞林注射剂的制备步骤中，按重量组分将70%~80%右旋糖酐20、15%~20%甘露醇和适量戈那瑞林入罐，溶解于配料罐中30℃以下的注射用水。

6.根据权利要求1或4所述的一种兽用戈那瑞林注射剂的制备方法，其特征在于：

戈那瑞林注射剂的制备步骤中，冻干过程为将灌装后的注射剂瓶移至冻干箱，冷冻至－35±1℃，保持2h，再将冻干箱降温至－45℃以下，开启真空泵，进行干燥。