[发明专利]一种兽用戈那瑞林注射剂的制备方法

说明书

本发明涉及一种兽用戈那瑞林注射剂的制备方法，包括戈那瑞林的合成、纯化和注射剂的制备；戈那瑞林的合成包括十个氨基酸的依次偶联及肽树脂的裂解，戈那瑞林粗肽的纯化包括洗脱、转盐、浓缩、冻干，戈那瑞林注射剂的制备包括对注射剂瓶的洗涤干燥、对瓶塞的清洗、灭菌、干燥和配料罐的溶解、压滤、半压塞灌装、冻干、真空压塞及轧盖。本发明的优点为：能耗低，收率高，环境友好，解决了现有工艺成本高、收率低、纯度差的问题。

技术领域

本发明涉及兽药制造技术领域，具体涉及一种兽用戈那瑞林注射剂的制备方法。

背景技术

戈那瑞林为人工合成的促性腺激素释放素，属肽类化合物，为十肽，和哺乳动物下丘脑分泌的促性腺激素释放激素天然提取物结构完全相同。促性腺激素释放激素，戈那瑞林能够促进垂体促卵泡素（FSH）和促黄体素（LH）的产生和释放。单一注射戈那瑞林后，引起促卵泡素和促黄体素单次脉冲式释放，主要用于治疗奶牛的卵泡囊肿。

国内自2008年开始，就有单位进行兽用戈那瑞林原料药合成及其注射剂制备的研究。然而，现有的戈那瑞林原料药的合成及其注射剂的制备存在诸多缺陷：

1、当前研制生产的戈那瑞林注射剂需要凉暗处保存，不便于贮存流通，提高贮存流通的使用成本，增加产品贮存不当所致的质量风险。

2、戈那瑞林的合成技术采用低替代度的Rink Amide AM Resin树脂。

3、戈那瑞林的合成技术未进行树脂端基封闭，或封闭不彻底。

4、戈那瑞林的合成技术采用三氟乙酸溶液进行树脂与肽链的裂解，裂解过程中副反应较多，降低了合成纯度。

5、采用普通C18填料来纯化戈那瑞林， 纯度欠佳。

发明内容

本发明的目的是提供一种能耗低、收率高、环境友好的兽用戈那瑞林注射剂的制备方法。

为了达到上述目的，本发明通过以下技术方案来实现：

一种兽用戈那瑞林原料药及其注射剂的制备方法，包括戈那瑞林的合成、纯化和注射剂的制备；

戈那瑞林的合成步骤如下：

（1-1）第一个氨基酸的偶联

取1mol Rink AM 树脂放置于室温中复温20min，替代度0.9mmol/g；

将复温好的树脂加入反应柱中，用DMF洗涤两次，每次洗涤2min，加入DCM溶胀30min；

加入哌啶溶液脱保护两次，按DMF、MeOH、DCM、DMF顺序洗涤，每次洗涤1.5min；

在第二次脱保护的同时，取1.6mol Fmoc-Gly-OH、1.6mol偶联试剂B，用DMF溶解，冷却至10℃以下，加入2mol偶联试剂A活化5 min，活化后的偶联液加入反应釜中搅拌，于30℃反应1.5h，茚检；茚检合格，抽掉反应液；

加入DMF和2mol 封闭试剂AC₂O溶液，搅拌反应3小时；

（1-2）第二个氨基酸的偶联

重复步骤（1-1）中哌啶溶液脱保护和顺序洗涤，取同量的Fmoc-Pro-OH和偶联试剂进行溶解、搅拌、茚检和抽液；

（1-3）同步骤（1-2）依次偶联第三至第十个氨基酸，分别为Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-His(trt)-OH、PGlu，得到戈那瑞林肽树脂，置于不锈钢托盘吹干；

（1-4）肽树脂的裂解