[发明专利]一种在线放大生产鸡传染性法氏囊病病毒的方法

说明书

本发明属于兽用生物制品技术领域，具体涉及一种在线放大生产鸡传染性法氏囊病病毒的方法，所述方法步骤包括：S1、种子细胞的制备；S2、三级在线放大培养；S3、病毒接种；S4、病毒培养与收获。与现有技术相比，本发明能显著降低生产成本，大规模生产高滴度的鸡传染性法氏囊病病毒，同时还能使细胞在传代时保持较高的细胞增殖速率，减少血清残留对终产品的不良影响。

技术领域

本发明属于兽用生物制品技术领域，具体涉及一种在线放大生产鸡传染性法氏囊病病毒的方法。

背景技术

鸡传染性法氏囊病(IBD)又称甘波罗病，是由传染性法氏囊病毒引起的以破坏鸡的中枢免疫器官法氏囊为主要发病机制的病毒性传染病。由于该病发病突然、病程短、传染性高、死亡率高，且可引起免疫抑制，是养鸡业的主要传染病之一。目前，对鸡传染性法氏囊病尚无特别有效的治疗药物，对鸡群进行免疫接种是预防该病的最佳方法。可以对雏鸡进行疫苗接种以产生主动免疫，也可给种鸡强化免疫以使其后代获得被动免疫，并在出壳后的最关键的2～3周免受感染，因此，病毒疫苗的制备至关重要。

中国发明专利CN103316334B公开了一种鸡传染性法氏囊病活疫苗及其生产方法，该发明通过研究，筛选出具有免疫原性好和抗原谱较广的鸡传染性法氏囊病病毒毒株，研制出鸡传染性法氏囊病三价活疫苗。该疫苗制备方法为：将病毒接种于SPF鸡胚制成的成纤维细胞，培养72-96h，待细胞病变70％时收获毒液。该疫苗免疫原性好、能够突破较高水平母源抗体、免疫持续期长达3个月以上、对不同毒株均具有良好保护，但该发明生产疫苗的方法培养时间长，操作劳动强度大，不易大规模化生产。

随着动物细胞生物反应的不断发展，细胞大规模培养技术已成为疫苗生物制品领域最重要的关键技术之一，其中搅拌式生物反应器添加微载体能培养各种类型的动物细胞、病毒，培养工艺容易放大，产品质量稳定，适合于工业化生产，在生物制品开发中潜力很大。

石岗等在《利用生物反应器和Vero细胞培养鸡传染性法氏囊病病毒的研究》中，公开了鸡传染性法氏囊病病毒在Vero细胞上增殖的培养条件为：血清2％，微载体2g/L，pH7.0，接毒量为0.05％，收毒时间为接毒后培养108h，病毒可在较长一段时间维持高的病毒滴度，比传统转瓶生产方法至少提高1个毒价，可用于IBDV规模化生产。但大多数一次性使用的微载体价格昂贵，且在培养过程中，随着传代代数的增加，细胞在微载体上的生长速率随之下降，传代过程中不能维持稳定的细胞增殖速率，这些因素成为微载体应用于大规模细胞培养的障碍，同时，减少血清的影响也是目前疫苗生产技术的一大难点。

因此，为了解决现有的技术问题，本发明提供了一种在线放大生产鸡传染性法氏囊病病毒的方法，该方法能保持细胞在传代时较高的细胞生长速率，减少血清残留对终产品的不良影响，大规模生产高滴度的鸡传染性法氏囊病病毒，同时还能降低生产成本。

发明内容

本发明旨在提供一种在线放大生产鸡传染性法氏囊病病毒的方法，能降低生产成本，大规模生产高滴度的鸡传染性法氏囊病病毒，同时能保持细胞在传代时较高的细胞生长速率，减少血清残留对终产品的不良影响。

为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种在线放大生产鸡传染性法氏囊病病毒的方法，包括以下步骤：

S1、种子细胞的制备：取贴壁细胞进行转瓶培养得到种子细胞，当细胞数量达到0.65-1.30×10¹⁰cells时进行三级在线放大培养；