[发明专利]检测抗小麦白粉病Pm57基因的通用分子标记、引物、检测方法及应用

权利要求书

1.一种检测抗小麦白粉病Pm57基因的通用分子标记，其特征在于，所述通用分子标记为分子标记X185442，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种用于扩增权利要求1所述通用分子标记的引物，其特征在于，所述引物的序列为：

上游引物185442F：5’-GCACGGTGGGTGTGTTCC-3’

下游引物185442R：5’-CTCACTATGATGTGTGAGGTTCTT-3’。

3.一种利用权利要求2中所述引物检测抗小麦白粉病Pm57基因的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

S1，提取待检测小麦的基因组DNA；所述小麦为小麦-西尔斯山羊草染色体2S^S#1添加系2011-400和易位系89(6)88、89(5)69、89-346；

S2，以所述小麦的基因组DNA为模板，以上游引物185442F和下游引物185442R为引物进行PCR扩增；

S3，琼脂糖凝胶电泳检测：用1×TAE缓冲液和琼脂糖配制浓度为3.0％的琼脂糖凝胶，加入溴化乙锭至溴化乙锭终浓度为0.5μg/ml，在额定电压150V下电泳70min，后用紫外光透射仪记录观察电泳结果；如果检测到210bp的扩增条带，则说明待测小麦的基因组DNA中含有特异分子标记X185442，且含有抗小麦白粉病Pm57基因；如果检测不到210bp的扩增条带，则说明待测小麦的基因组DNA中不含特异分子标记X185442，不含抗小麦白粉病Pm57基因。

4.根据权利要求3中所述引物检测抗小麦白粉病Pm57基因的方法，其特征在于，所述PCR扩增使用的反应体系为：

基因组DNA 2μL，上游引物185442F 1.5μL，下游引物185442R 1.5μL，2×Es TapMaster Mix 7.5μL，ddH₂O 2.5μL；总体积15μL；上游引物185442F和下游引物185442R的浓度均为5μM；

所述PCR扩增使用的反应条件为：

94℃ 10min；

降落10个循环：

94℃ 20s

63℃→58.5℃ 20s，每个循环减0.5℃

72℃ 2min

继续补充的35个循环：

94℃ 20s

58℃ 20s

72℃ 2min

终延伸：

72℃ 10min

16℃ forever。

5.根据权利要求1所述的通用分子标记在检测小麦抗小麦白粉病Pm57基因或者在培育抗小麦白粉病小麦品种中的应用，其特征在于，所述小麦品种为小麦-西尔斯山羊草染色体2S^S#1添加系2011-400和易位系89(6)88、89(5)69、89-346。

6.根据权利要求2所述的引物在检测小麦抗小麦白粉病Pm57基因或者在培育抗小麦白粉病小麦品种中的应用，其特征在于，所述小麦品种为小麦-西尔斯山羊草染色体2S^S#1添加系2011-400和易位系89(6)88、89(5)69、89-346。