[发明专利]一种全身糖皮质激素受体基因过量表达转基因斑马鱼的构建方法有效
| 申请号： | 201810268674.8 | 申请日： | 2018-03-29 |
| 公开（公告）号： | CN108642082B | 公开（公告）日： | 2022-05-13 |
| 发明（设计）人： | 王明勇 | 申请（专利权）人： | 苏州木芮生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/65;A01K67/027;C12Q1/6888 |
| 代理公司： | 苏州翔远专利代理事务所(普通合伙) 32251 | 代理人： | 王华 |
| 地址： | 215000 江苏省苏州市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 全身 糖皮质激素 受体 基因 过量 表达 转基因 斑马 构建 方法 | ||
1.一种全身糖皮质激素受体基因过量表达转基因斑马鱼的构建方法，其特征在于：包括下列步骤：
第一步：利用斑马鱼基因克隆和酶切连接的方法构建得到载体Tol2-Crystallin启动子-EGFP-pA-EF1α启动子-GRcDNA-pA-Tol2；
第二步：将第一步得到的载体和Tol2 mRNA共注射到单细胞的斑马鱼受精卵中；
第三步：培育所述受精卵获得全身过表达糖皮质激素受体的转基因斑马鱼；
所述Tol2-Crystallin启动子-EGFP-pA-EF1α启动子-GRcDNA-pA-Tol2载体的构建包括Tol2-Crystallin启动子-EGFP-pA-Tol2载体的构建、Tol2-EF1α启动子-GRcDNA-pA-Tol2载体的构建和利用同源重组的技术将Crystallin启动子-EGFP-pA片段重组进入Tol2- EF1α启动子-GRcDNA-pA-Tol2载体。
2.根据权利要求 1所述的全身糖皮质激素受体基因过量表达转基因斑马鱼的构建方法，其特征在于：在第二步中，采用显微注射的方法。
3.根据权利要求 1所述的全身糖皮质激素受体基因过量表达转基因斑马鱼的构建方法，其特征在于：还包括提取F1代斑马鱼基因组，然后利用PCR方法对全身过表达糖皮质激素受体的转基因斑马鱼进行鉴定；所述PCR方法的引物序列为：
正向引物：GGTGAACTTCAAGATCCGCC；
反向引物：CTTGTACAGCTCGTCCATGC。
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