[发明专利]含烟草PDS基因片段的黄瓜花叶病毒RNA2弱毒突变型质粒载体及其应用有效
| 申请号： | 201810268723.8 | 申请日： | 2018-03-29 |
| 公开（公告）号： | CN108486148B | 公开（公告）日： | 2021-07-13 |
| 发明（设计）人： | 原雪峰;刘珊珊;曹欣然;于成明 | 申请（专利权）人： | 山东农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12N15/66;A01H5/00;A01H6/82 |
| 代理公司： | 济南誉丰专利代理事务所(普通合伙企业) 37240 | 代理人： | 李茜 |
| 地址： | 271000 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 烟草 pds 基因 片段 黄瓜花叶病毒 rna2 突变型 质粒 载体 及其 应用 | ||
1.一种含烟草PDS基因片段的黄瓜花叶病毒RNA2弱毒突变型质粒载体pCB301-CMVFny2-PDS199-Q，其特征在于，所述黄瓜花叶病毒RNA2弱毒突变型质粒载体pCB301-CMVFny2-PDS199-Q是以CMVFny RNA2侵染性克隆质粒pCB301-CMVFny2为模板，利用反向PCR扩增方法，获得2b蛋白提前终止的中间载体pCB301-CMVFny2-del2b，同时在紧邻2a蛋白终止密码子后的2661位和2662位间插入含BamH I、Spe I和Sam I的多克隆位点及TAATA序列；然后，利用RT-PCR从烟草中扩增PDS较保守的199 bp序列，再利用酶切和连接方法将此199 bp PDS序列插入到中间载体pCB301-CMVFny2-del2b中；
所述199 bp PDS序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；
所述质粒载体含有CMVFny株系RNA2全序列，并在2a蛋白终止密码子后插入有烟草PDS基因199bp的片段；RNA2全序列、插入的含BamH I、Spe I和Sam I的多克隆位点及TAATA序列以及199 bp PDS序列如SEQ ID NO.2所示；
用于反向PCR扩增的引物序列分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示；用于扩增烟草PDS基因片段的引物序列分别如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。
2.权利要求1所述的含烟草PDS基因片段的黄瓜花叶病毒RNA2弱毒突变型质粒载体pCB301-CMVFny2-PDS199-Q在黄瓜花叶病毒弱毒疫苗制备和/或研究中的应用。
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