[发明专利]一种咔唑类稳定同位素巯基化合物标记试剂及其合成方法与应用

权利要求书

1.一种咔唑类稳定同位素巯基化合物标记试剂，其特征在于：以咔唑为母体环，马来酰亚胺为反应基团与同位素标记基团，其化学名称为：N-(4-(咔唑-9-基)-苯基)-N-[d₀]/[d₂]马来酰亚胺，其化学结构式为：

其中：当X＝H时，为N-(4-(咔唑-9-基)-)苯基)-N-[d₀]马来酰亚胺；当X＝D时，为N-(4-(咔唑-9-基)-)苯基)-N-[d₂]马来酰亚胺。

2.一种如权利要求1所述咔唑类稳定同位素巯基化合物标记试剂的合成方法，其特征在于，将咔唑与4-溴乙酰苯胺进行取代反应，得到中间体Ⅰ9-((4-乙酰氨基)-苯基)-咔唑，然后中间体Ⅰ在碱性条件下加热水解，得到中间体Ⅱ9-((4-氨基)-苯基)-咔唑；将中间体Ⅱ与[d₀]/[d₂]马来酸酐进行酰化缩合反应，生成目标产物N-(4-(咔唑-9-基)-苯基)-N-[d₀]/[d₂]马来酰亚胺。

3.根据权利要求2所述的合成方法，其特征在于，该合成方法具体包括以下步骤：

1)取代反应：将咔唑和4-溴乙酰苯胺溶解到二甲亚砜中，并与碘化亚铜、二叔戊酰甲烷和碳酸钾混合，油浴130℃反应12h，反应结束待反应液冷却至室温后抽滤，得抽滤液，然后将抽滤液与(10-30)wt％的NaCl混合析出沉淀，回收沉淀固体并干燥，得到中间体Ⅰ9-((4-乙酰氨基)-苯基)-咔唑；

2)水解反应：将中间体Ⅰ溶解于溶有氢氧化钾水溶液的二甲亚砜溶液中，于100℃反应2小时，冷却后，将反应液与水混合，回收固体并干燥，用乙醇重结晶制得中间体Ⅱ9-((4-氨基)-苯基)-咔唑；

3)酰化反应：将[d₀]/[d₂]马来酸酐溶解到丙酮中，滴加溶有中间体Ⅱ的丙酮溶液，于25℃反应1小时，反应结束后将反应液溶剂蒸干，回收固体并干燥；固体干燥后加入乙酸酐溶解，再加入无水乙酸钠，于85℃下反应1小时，待反应液冷却到25℃后慢慢倒入水中，回收固体并干燥，用乙腈重结晶至少三次得目标产物N-(4-(咔唑-9-基)-苯基)-N-[d₀]/[d₂]马来酰亚胺。

4.根据权利要求3所述的合成方法，其特征在于，在步骤1)的所述取代反应中，咔唑与4-溴乙酰苯胺摩尔比为1:1.5，碘化亚铜、二叔戊酰甲烷和碳酸钾的加入量分别为咔唑质量的25％、22％和50％。

5.根据权利要求3所述的合成方法，其特征在于，在步骤2)的所述水解反应中，氢氧化钾的加入量为9-((4-氨基)-苯基)-咔唑质量的30％。

6.根据权利要求3所述的合成方法，其特征在于，在步骤3)的所述酰化反应中，9-((4-氨基)-苯基)-咔唑与[d₀]/[d₂]马来酸酐的摩尔比为1:1.1，乙酸钠的加入量为9-((4-氨基)-苯基)-咔唑质量的10％。

7.一种咔唑类稳定同位素巯基化合物标记试剂的应用，其特征在于：该标记试剂结构如权利要求1所述，或者通过如权利要求2-6中任一项所述合成方法合成；

其中，该标记试剂用于检测样品中巯基化合物的含量。