[发明专利]一种己烯雌酚类抗生素免疫亲和柱及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种己烯雌酚类抗生素免疫亲和柱，其特征在于主体结构包括柱体、盖板、进样口、第一筛板、填料、第二筛板和出样口；圆管状结构的柱体的顶部设置有圆形片状结构的盖板，盖板的中心设置有圆管状结构的进样口，柱体的内部上部空间为空腔，柱体的内部中间设置有开设有筛孔的圆形片状结构的第一筛板，柱体的内部下部空间填充有填料，柱体的底部设置有开设有筛孔的圆形片状结构的第二筛板，第二筛板上设置有上宽下窄的锥形管状结构的出样口；填料为腹泻性贝类毒素抗体-蛋白G-sepharose填料。

2.一种己烯雌酚类抗生素免疫亲和柱制备方法，其特征在于具体工艺过程包括活化、偶联、连接、交联和装柱共五个步骤：

(一)活化：用蒸馏水充分冲洗浓度为2％的预溶胀琼脂糖凝胶sepharose2B，洗去琼脂糖凝胶sepharose2B中残存的乙醇，蒸馏水与琼脂糖凝胶sepharose2B的体积比为20:1，用漏斗过滤掉液体，得到湿凝胶，称取5克湿凝胶与7.5毫升摩尔质量为0.8M的NaOH水溶液、2毫升质量百分比浓度为30％的环氧氯丙烷水溶液和5毫升浓度为2mg/mL的NaBH₄水溶液在温度为25℃的条件下下进行8小时的摇床反应，反应结束后，用50毫升蒸馏水洗涤湿凝胶，洗去湿凝胶中混杂的环氧氯丙烷，完成琼脂糖凝胶sepharose2B的活化，活化后的琼脂糖凝胶sepharose2B作为载体备用；

(二)偶联：取1克载体用偶联缓冲液洗涤3次，将载体加入20毫升浓度为2mg/mL的基因重组蛋白G中在室温条件下偶联4小时，偶联缓冲液选取为pH值为8.9的摩尔质量为0.1M的NaHCO₃水溶液和摩尔质量为0.8M的NaCl水溶液的混合液，将偶联后的载体用pH值为7.4和浓度为20mM的PBS洗涤3次，得到偶联有基因重组蛋白G的琼脂糖凝胶sepharose2B，简称为蛋白G-sepharose；

(三)连接：将己烯雌酚抗体溶解于pH值为7.4和浓度为20mM的PBS中，得到10毫升浓度为2mg/mL的抗体，将蛋白G-sepharose用pH值为7.4和浓度为20mM的PBS洗涤3次，PBS的每次使用量为30毫升，将抗体加入到洗涤过的蛋白G-sepharose中在室温条件下结合30分钟，得到连接有抗体的蛋白G-sepharose，用pH值为7.4和浓度为20mM的PBS洗涤连接有抗体的蛋白G-sepharose 3次，PBS的每次使用量为30毫升，连接有抗体的蛋白G-sepharose简称为抗体—蛋白G—sepharose；

(四)交联：用pH值为9.0和浓度为0.1M的硼酸缓冲液洗涤抗体—蛋白G—sepharose 3次，硼酸缓冲液的每次使用量为30毫升，在抗体—蛋白G—sepharose中加入pH值为9.0和浓度为0.1M的硼酸缓冲液以及交联剂，交联剂为庚二亚氨酸二甲酯，当抗体—蛋白G—sepharose的浓度为20mM时停止交联剂的加入，使抗体—蛋白G—sepharose、硼酸缓冲液和交联剂在室温条件下交联1小时，加入pH值为9.0和浓度为50mM的乙醇胺终止交联，并用浓度为50mM的乙醇胺封闭10分钟，用pH值为7.4和浓度为20mM的PBS洗涤交联后的抗体—蛋白G—sepharose 3次，得到抗体—蛋白G—sepharose填料；

(五)装柱：将用10毫升pH值为7.4和浓度为20mM的PBS重悬后的抗体—蛋白G—sepharose填料装入到柱体1的下部空间中，得到己烯雌酚免疫亲和柱，完成己烯雌酚免疫亲和柱的制备；抗体—蛋白G—sepharose填料的装入量根据需要制备的己烯雌酚免疫亲和柱的容量选取。