[发明专利]一种鱼皮源脱细胞真皮基质及其制备方法

权利要求书

1.一种鱼皮源脱细胞真皮基质的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)鱼皮预处理：将鱼皮上的残肉刮干净，用无菌磷酸缓冲液清洗干净；

(2)杀菌消毒处理：清洗并浸泡鱼皮，对鱼皮进行杀菌消毒处理；

(3)脱脂处理：将经杀菌消毒处理的鱼皮浸泡在碱溶液中进行脱脂，然后用无菌磷酸缓冲液清洗干净；

(4)脱色处理：将经脱脂处理的鱼皮浸泡在脱色剂中进行脱色，然后用无菌磷酸缓冲液清洗干净；

(5)高低渗处理：将经脱色处理的鱼皮置于低渗溶液内震荡处理，再置于高渗溶液内震荡处理，间歇超声清洗；

步骤(5)中，所述低渗溶液为蒸馏水，低渗溶液的处理时间为16～24h，所述高渗溶液为1M NaCl，高渗溶液处理时间为16～24h；超声用的超声波清洗器的频率为40kHz，功率为250W，每次超声的清洗时间为30～60min，间歇时间为2～4h；

(6)强碱消蚀处理：将经高低渗和超声处理的鱼皮置于强碱溶液内消蚀处理，间歇超声清洗，无菌磷酸缓冲液清洗干净；

步骤(6)中，所述强碱溶液为质量浓度为3％～6％的氢氧化钾溶液，鱼皮与氢氧化钾溶液的体积比为1:4～8，浸泡在氢氧化钾溶液中的时间为16～24h；超声用的超声波清洗器的频率为40kHz，功率为250W，每次超声的清洗时间为30～60min，间歇时间为2～4h；然后用10mM、pH为7.4的无菌磷酸缓冲液清洗3～6次；

(7)反复冻融处理：将经强碱消蚀处理的鱼皮置于冰箱梯度冻融，然后清洗；

步骤(7)中，梯度冻融处理中，第一次冻结温度为-20℃，第二次冻结温度为-40℃，第三次冻结温度为-80℃，解冻温度均为常温，冻融间隔时间为3～6h；

(8)冻干及定型处理：将经过步骤(7)处理的鱼皮在冻干机中进行冻干得脱细胞真皮基质，然后裁剪成不同的规格独立真空包装。

2.根据权利要求1所述的鱼皮源脱细胞真皮基质的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，用10mM、pH为7.4的无菌磷酸缓冲液清洗3～6次；且步骤(1)中用于制备脱细胞真皮基质的所述鱼皮为巴沙鱼皮、罗非鱼皮、鳗鱼皮、鲇鱼皮、鮰鱼皮中的一种，所述鱼皮的厚度为0.3mm～1mm。

3.根据权利要求1所述的鱼皮源脱细胞真皮基质的制备方法，其特征在于：步骤(2)中，杀菌消毒使用溶液为pH为6.5～7.5的电解水，处理方式为在室温条件下浸泡15min～30min；清洗方式为plasma等离子清洗。

4.根据权利要求1所述的鱼皮源脱细胞真皮基质的制备方法，其特征在于：步骤(3)中，所述脱脂方式为二次脱脂方式：其中，第一次脱脂用的碱溶液为质量浓度为1％～3％的碳酸氢钠溶液，鱼皮与碳酸氢钠溶液的体积比为1:3～6，第一次的脱脂时间为18～24h，第二次脱脂用的碱溶液为质量浓度为0.5％～1.5％的氢氧化钾溶液，鱼皮与氢氧化钾溶液的体积比为1:3～6，第二次的脱脂时间为12～18h；然后用10mM、pH为7.4的无菌磷酸缓冲液清洗3～6次。

5.根据权利要求1所述的鱼皮源脱细胞真皮基质的制备方法，其特征在于：步骤(4)中，所述脱色剂分别为高锰酸钾和亚硫酸氢钠溶液，其中，先用质量浓度为1％～1.5％的高锰酸钾溶液脱色处理20min～30min，鱼皮与高锰酸钾溶液的体积比为1:4～8，然后，再用质量浓度为2％～3％的亚硫酸氢钠溶液脱色处理1h～2h，鱼皮与亚硫酸氢钠溶液的体积比为1:4～8，重复循环3～6次；然后用10mM、pH为7.4的无菌磷酸缓冲液清洗3～6次。

6.根据权利要求1所述的鱼皮源脱细胞真皮基质的制备方法，其特征在于：步骤(8)中，经冻干得到的脱细胞真皮基质为双层结构，一层疏松，一层致密，有利于细胞增长和黏附；所述脱细胞真皮基质的裁剪规格为1cm×1cm、1.5cm×2cm、2cm×2.5cm中的一种。

7.根据权利要求1～6任一项所述的鱼皮源脱细胞真皮基质的制备方法制备获得的鱼皮源脱细胞真皮基质，所其特征在于：所述鱼皮源脱细胞真皮基质在干态条件下的拉伸强度为4～6MPa，断裂伸长率为10％～15％，热收缩温度为60～100℃；所述鱼皮源脱细胞真皮基质在湿态条件下的拉伸强度为2～3MPa，断裂伸长率为25％～50％，热收缩温度为80～120℃。