[发明专利]一种鱼皮源脱细胞真皮基质及其制备方法

说明书

本发明公开了一种鱼皮源脱细胞真皮基质的制备方法，包括以下步骤：(1)鱼皮预处理；(2)杀菌消毒处理；(3)脱脂处理；(4)脱色处理；(5)高低渗处理；(6)强碱消蚀处理；(7)反复冻融处理；(8)冻干及定型处理。本发明采用了渗透压交替处理裂解细胞，同时配合强碱消蚀和反复冻融的方法去除细胞成分，达到了较为理想的去除细胞的效果，由本发明制得的鱼皮源脱细胞真皮基质具有双层结构，且处理过程对真皮的支架结构破坏较小，能很好的保存支架材料的完整性，有利于后期细胞的粘附与生长。

技术领域

本发明属于生物医用材料制备技术领域，具体涉及一种鱼皮源脱细胞真皮基质及其制备方法。

背景技术

组织工程是20世纪80年代后期兴起的一门新兴交叉学科，用于组织工程的支架材料主要有天然的生物材料和人工合成的高分子材料。脱细胞真皮基质是一种优良的生物医用材料，在皮肤烧伤科有着十分广泛的应用，后来人们尝试将其应用于口腔修复，覆盖于骨缺损创面，发现数周后其表面能很好地愈合。脱细胞真皮基质是一种通过特定理化处理，脱去供体皮肤中的表皮角朊细胞和真皮成纤维细胞的天然细胞外基质，生物相容性好，诱导骨再生能力强。脱细胞真皮基质的研究历史可以追溯到20世纪60年代，但其真正发展成熟并成功应用于临床只有十几年历史，随着脱细胞技术的不断发展和应用技术的不断完善，异种脱细胞真皮基质具有更广阔的发展前景。

发明专利CN 102225218 B公开了一种利用超声波制备脱细胞真皮基质的方法，该专利的方法包括对剥离的哺乳动物皮肤进行剔除毛发的处理；用消毒液消毒皮肤，在无菌条件下并用机械法制得网状层真皮；将真皮置于低渗溶液内震荡处理0.5小时-12小时，再置于高渗溶液内震荡处理0.5小时-12小时；重复前步骤1-6次；将真皮置于洗涤剂内用超声波清洗器处理12小时-48小时；用无菌磷酸盐缓冲液洗涤1-6次，环氧乙烷消毒即得脱细胞真皮基质。该专利的制备工艺简单实用，细胞去除较为彻底。但是，该专利的方法超声洗涤操作时间过长，容易使真皮基质的天然结构遭到破坏。

发明专利CN 106310352 A公开了一种抗菌性脱细胞真皮基质敷料的制备方法，该制备方法包括以下步骤：选取健康的哺乳动物、剥离动物皮肤、剔除毛发、制备断层皮片、激光制孔、低温冻融、超声波振荡、脱脂处理、脱细胞处理、浸泡水溶性壳聚糖、冷冻干燥、包装和辐照灭菌后得到抗菌性脱细胞真皮基质敷料。该发明的抗菌性脱细胞真皮基质敷料具有胶原三维完整结构，脱细胞彻底，制作周期短并且具有抗菌功能的特点。但是，该发明的方法制备过程中采用了激光打孔技术，破坏了真皮基质天然的疏松多孔结构，不利于细胞的黏附和增长。

目前，大部分专利制备异种脱细胞真皮基质都是用猪皮和牛皮等哺乳动物，但是在信仰伊斯兰教、回教等人群中，来源于哺乳动物的脱细胞真皮基质的应用受到限制。而且，疯牛病、口蹄疫等传染性疾病的发生和流行，使人们对来源于哺乳动物的脱细胞真皮基质的安全性产生了质疑。因此，用水生生物代替哺乳动物成为研究热点，而鱼类动物的真皮组成上与哺乳动物等门类差异巨大，很难从现有技术中的其他动物门类获得相关的技术启示，关于用鱼皮制备脱细胞真皮基质在医用材料领域还未见报道。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种鱼皮源脱细胞真皮基质及其制备方法。

本发明通过以下技术方案实现，一种鱼皮源脱细胞真皮基质的制备方法，包括以下步骤：

(1)鱼皮预处理：将鱼皮上的残肉刮干净，用无菌磷酸缓冲液清洗干净；

(2)杀菌消毒处理：清洗并浸泡鱼皮，对鱼皮进行杀菌消毒处理；

(3)脱脂处理：将经杀菌消毒处理的鱼皮浸泡在碱溶液中进行脱脂，然后用无菌磷酸缓冲液清洗干净；

(4)脱色处理：将经脱脂处理的鱼皮浸泡在脱色剂中进行脱色，然后用无菌磷酸缓冲液清洗干净；

(5)高低渗处理：将经脱色处理的鱼皮置于低渗溶液内震荡处理，再置于高渗溶液内震荡处理，间歇超声清洗；