[发明专利]鉴定松材线虫的引物组合物和应用其的产品及其应用和检测方法及其应用在审
| 申请号： | 201810270654.4 | 申请日： | 2018-03-29 |
| 公开（公告）号： | CN108315441A | 公开（公告）日： | 2018-07-24 |
| 发明（设计）人： | 刘青华;刘彬;周志春 | 申请（专利权）人： | 中国林业科学研究院亚热带林业研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙) 11371 | 代理人： | 覃蛟 |
| 地址： | 310000 浙江省*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 松材线虫 引物组合物 应用 检测 种鉴定 马尾松 生物防治 第二引物 第一引物 检测领域 两对引物 松墨天牛 成虫 巢式PCR 幼虫 对设备 试剂盒 采样 虫体 离体 | ||
1.一种鉴定松材线虫的引物组合物，其特征在于，所述引物组合物包括第一引物对和第二引物对；
所述第一引物对的引物序列为：
上游引物-FP：5’-GATTCGCGTCGTTCCGCCTA-3’(SEQ ID No.1)；
下游引物-RP：5’-GGAACAAACGCTCCGCTAAA-3’(SEQ ID No.2)；
所述第二引物对的引物序列为：
上游引物-FP：5’-CGTGCTGTTGTTGAGTTGGC-3’(SEQ ID No.3)；
下游引物-RP：5’-AGACGACTGTCACAACGTGC-3’(SEQ ID No.4)。
2.一种利用权利要求1所述的引物组合物鉴定松材线虫的检测方法，其特征在于，以线虫样本的基因组DNA为模板，用所述鉴定松材线虫的引物组合物进行巢式PCR，检测扩增产物。
3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述线虫样本为同一种线虫的纯样本或多种线虫的混合样本，其虫态为成虫和/或卵和/或幼虫。
4.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述线虫样本为从松墨天牛或马尾松直接提取DNA的混合样本。
5.根据权利要求2-4任一项所述的检测方法，其特征在于，以线虫样本的基因组DNA为模板，用第一引物对进行PCR扩增得到次级模板，再用第二引物对对所述次级模板进行PCR扩增，检测扩增产物。
6.如权利要求1所述的引物组合物在制备用于鉴定松材线虫的产品中的应用；
优选地，所述产品包括试剂或试剂盒。
7.一种用于鉴定松材线虫的试剂，其特征在于，包括权利要求1所述的引物组合物。
8.一种用于鉴定松材线虫的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的引物组合物或权利要求7所述的试剂；
优选地，所述试剂盒还包括PCR反应缓冲液，Mg2+，dNTP和Taq DNA聚合酶。
9.如权利要求1所述的引物组合物或权利要求2-5任一项所述的检测方法或权利要求7所述的试剂或权利要求8所述的试剂盒在鉴定马尾松体内是否感染松材线虫中的应用。
10.如权利要求1所述的引物组合物或权利要求2-5任一项所述的检测方法或权利要求7所述的试剂或权利要求8所述的试剂盒在鉴定松材线虫中的应用。
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