[发明专利]鉴定松材线虫的引物组合物和应用其的产品及其应用和检测方法及其应用

说明书

本发明涉及生物防治检测领域，具体而言，提供了一种鉴定松材线虫的引物组合物和应用其的产品及其应用和检测方法及其应用。本发明提供了一种鉴定松材线虫的引物组合物，包括第一引物对和第二引物对。本发明提供的检测方法简便快捷，对设备没有特殊的要求，仅需两对引物对就可以进行检测，成本低。利用巢式PCR的高特异性经过2轮PCR即可高效对松材线虫进行鉴定，不论是从松墨天牛或马尾松采样直接鉴定还是离体的虫体鉴定，不论是成虫还是幼虫，都能准确、快速得出结果。本发明提供的产品为试剂或试剂盒，即使是非松材线虫专家的普通操作人员也可以快速准确的对松材线虫进行鉴定。

技术领域

本发明涉及生物防治检测领域，具体而言，涉及一种鉴定松材线虫的引物组合物和应用其的产品及其应用和检测方法及其应用。

背景技术

松材线虫属于线形动物门，滑刃目、滑刃总科、滑刃科、伞滑刃属。松材线虫是我国危害较大的外来入侵物种之一，导致松材线虫病，植物染病40天后即可死亡，从发病到整片松林毁灭仅需3-5年的时间，是林业上的一种毁灭性的病虫害，被称为森林“癌症”。松材线虫病主要通过松墨天牛，木材和木质包装材料三种渠道进行传播。被松材线虫感染后的松树，针叶呈现黄褐色或红褐色，萎蔫下垂，树脂分泌停止，在树干上可观察到天牛侵入孔或产卵痕迹，病树整株干枯死亡，木材蓝变。

虽然国内外科学家以对松材线虫病进行了大量的试验研究，但是还未形成一套经济有效的防治措施，未找到一种实用的治愈感病松树的方法。因此，只能加强松材线虫病的检测和预警，及时发现并彻底清除感染树，严防疫情进一步扩散。同时，与松材线虫同属的其他伞滑刀线虫，由于同样有可能存在于植物体内并且与松材线虫的形态相似，形态学上难以辨认。在松树感染松材线虫病的早期尚未表现出外部症状的时候，同时大多松材线虫的虫态为幼虫，处于休眠阶段，因无法辨认而不能及时清理，导致防治效果不理想。

早期的松材线虫感染鉴定主要通过林间症状诊断或对线虫在形态学上进行鉴定，这些方法有很多的局限性，往往在感染后期才能发现并且需要对疑似松材线虫进行纯培养再鉴定，周期长同时又有很大的漏检或错检的可能性。后来发展的流胶诊断法，生化检测法和化学诊断法都有各自的局限性而不方便使用。近年来，从分子水平上鉴定松材线虫成为更好的方式，分子生物学检测是通过分析松材线虫DNA特有的基因组区域而对其作出准确鉴定的方法。例如目前的探针诊断法，其缺点是所需DNA量大、技术难度大，产生放射危害等；实时荧光定量PCR检测法，其缺点是成本较高并且不能对马尾松或松墨天牛直接进行检测，只能对离体线虫进行检测；环介导等温扩增反应检测方法，其缺点是需要复杂的引物设计程序，引物条数较多，操作复杂。

因此，开发一种快速、准确、简便易操作并且成本较低，对仪器没有特殊要求的松材线虫鉴定技术有很重要的实用价值。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种鉴定松材线虫的引物组合物，本发明的第二目的在于提供利用上述引物组合物鉴定松材线虫的监测方法，本发明的第三目的在于提供上述引物组合物在制备用于鉴定松材线虫的产品中的应用，本发明的第四目的在于提供一种用于鉴定松材线虫的试剂，本发明的第五目的在于提供一种用于鉴定松材线虫的试剂盒，本发明的第六目的在于提供上述引物组合物或试剂或试剂盒在鉴定马尾松体内是否感染松材线虫中的应用，本发明的第七目的在于提供上述引物组合物或试剂或试剂盒在鉴定松材线虫中的应用，以缓解现有技术中松材线虫鉴定的方法操作繁琐，成本高或特异性差的问题。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

本发明提供一种鉴定松材线虫的引物组合物，所述引物组合物包括第一引物对和第二引物对；

所述第一引物对的引物序列为：

上游引物-FP：5’-GATTCGCGTCGTTCCGCCTA-3’(SEQ ID No.1)；