[发明专利]一种检测保健品中苯二氮卓类物质的检测卡及其制备方法

权利要求书

1.一种检测保健品中苯二氮卓类物质的检测卡的制备方法，检测卡包括检测试纸条，检测试纸条的底层为底衬，底衬上依次粘贴有样品垫（1）、金标结合垫（2）、硝酸纤维素膜（3）及吸水垫（4），硝酸纤维素膜（3）上设有检测线（5）和质控线（6），其特征在于，包括以下步骤：

步骤一，制备浓度为1%的氯金酸水溶液和浓度为1%的柠檬酸三钠水溶液，将装有100mL超纯水的圆底烧瓶置于油浴恒温器上，边加热边搅拌，当水温达到95℃时加入2mL氯金酸水溶液，煮沸2min，再加入柠檬酸三钠水溶液，保持溶液沸腾10min，冷却至室温，制得粒径为28~32nm的胶体金颗粒溶液；

步骤二，在步骤一所得的胶体金颗粒溶液中加入0.1mol/L碳酸钾水溶液，将胶体金颗粒溶液的pH调至8.2~8.5，室温搅拌12min，加入1mg苯二氮卓单克隆抗体，室温搅拌30 min，加入25mL质量分数为10%的牛血清蛋白，室温搅拌30min后装入离心管，在温度为8℃，先在低转速为5000rpm下离心10min，之后在中转速8000rpm下离心20min，最后在转速为12000rpm下离心25min，弃上清液，留沉淀，沉淀中加入pH为8.2的缓冲液稀释至2mL，得到胶体金溶液，用胶体金溶液喷涂玻璃纤维垫片，制得金标结合垫（2）；

步骤三，在湿度为45~65%下，用pH值为8.2、浓度为10mM的PBS溶液配制1mg/mL羊抗鼠多克隆抗体溶液及1mg/mL苯二氮卓-牛血清蛋白，将喷膜仪中分别装入已配制好的10mL苯二氮卓-牛血清蛋白和10mL羊抗鼠多克隆抗体溶液，开始喷膜，喷后的硝酸纤维素膜（3）移入37℃恒温干燥箱中干燥10h后取出，得到膜孔径为3~5μm的硝酸纤维素膜（3）；

步骤四，制备质量分数为1%的异戊醇水溶液，在湿度为75%下，将步骤三所制备的硝酸纤维素膜（3）浸泡于100mL异戊醇水溶液和丙酮的混合溶液中，其中，异戊醇水溶液和丙酮的体积比为5:1，缓慢加热至40℃，保持5~8min，之后将温度提升至65℃，保持3~6min，取出硝酸纤维素膜（3）后用去离子水至少洗涤3遍，然后在60mL质量分数为5%的聚乙烯醇水溶液中浸泡10~20min，室温干燥后保存；

将样品垫（1）放入处理液中浸泡20min，浸泡后放入37℃恒温干燥箱、10h后完全干燥取出，处理液是由浓度为1%的牛血清蛋白、浓度为0.3%的硬脂酸钠、浓度为1%的Tritonx-1000、浓度为0.1%的十二烷基二甲基甜菜碱、混匀过滤后所得的滤液；

步骤五，将样品垫（1）和吸水垫（4）分别贴在底衬两端，金标结合垫（2）贴在底衬上靠近样品垫（1）的一端，样品垫（1）与金标结合垫（2）连接，醋酸纤维素膜（3）贴在底衬上靠近吸水垫（4）的一端，醋酸纤维素膜（3）与吸水垫（4）连接，醋酸纤维素膜（3）与金标结合垫（2）连接，醋酸纤维素膜（3）上包被检测线（5）和质控线（6）。

2.根据权利要求1所述的检测保健品中苯二氮卓类物质的检测卡的制备方法，其特征在于：还包括步骤一之前对实验容器的清洗，首先用超纯水将实验容器清洗干净，干燥后用0.4 mol/L浸泡液浸泡24~30h，浸泡液为重铬酸钾和硫酸溶液的混合液，硫酸溶液的质量分数为80~90%，用超纯水清洗3~4次，干燥备用。

3.根据权利要求2所述的检测保健品中苯二氮卓类物质的检测卡的制备方法，其特征在于：还包括步骤一之前对实验容器的清洗，首先用超纯水将实验容器清洗干净，干燥后用0.4mol/L浸泡液浸泡25h，浸泡液为重铬酸钾和硫酸溶液的混合液，硫酸溶液的浓度为80.5%，用超纯水清洗3次，干燥备用。

4.根据权利要求1所述的检测保健品中苯二氮卓类物质的检测卡的制备方法，其特征在于：步骤二中缓冲液的组分为：pH值为8.2和浓度为10mM的PBS溶液、5~6v%1.0M Tris液、1~2w/v%聚乙二醇4000、0.3~0.4w/v%牛血清白蛋白，0.3~0.4w/v%甘油和0.12~0.15w/v%卡松，余量为水。