[发明专利]用于检测产气荚膜梭菌的引物和探针及其应用

权利要求书

1.用于检测产气荚膜梭菌的引物和探针组合，其特征在于：

F引物序列如SEQ ID NO:1所示，R引物序列如SEQ ID NO:2所示，探针序列如SEQ IDNO:3所示。

2.权利要求1所述的引物和探针组合在非诊断目的的实时荧光RPA法检测产气荚膜梭菌中的用途。

3.一种用于非诊断目的检测产气荚膜梭菌的实时荧光RPA快速检测方法，其特征在于：提取待测样品的DNA作为模板，利用权利要求1所述的引物和探针组合在RPA体系中进行扩增，并实时检测荧光信号，若荧光信号明显增加，则待测样品中含有产气荚膜梭菌。

4.根据权利要求3所述的用于非诊断目的检测产气荚膜梭菌的实时荧光RPA快速检测方法，其特征在于：所述RPA反应体系中包括重悬缓冲液、ddH₂O、醋酸镁溶液和冻干酶制剂，所述冻干酶制剂包括dNTP、单链结合蛋白、recA重组酶、DNA聚合酶、核酸外切酶、三(羟甲基)甲基甘氨酸、聚乙二醇、二硫苏糖醇和肌酸激酶。

5.根据权利要求4所述的用于非诊断目的检测产气荚膜梭菌的实时荧光RPA快速检测方法，其特征在于：将所述引物和探针组合、待测样品的DNA模板、重悬缓冲液和ddH₂O混匀，加入到装有所述冻干酶制剂的反应管中，吹吸至完全溶解，再加入醋酸镁溶液，盖紧管盖，离心并涡旋后，放入等温扩增荧光检测系统中进行扩增，在扩增过程实时收集检测荧光信号。

6.根据权利要求5所述的用于非诊断目的检测产气荚膜梭菌的实时荧光RPA快速检测方法，其特征在于：扩增温度为39℃，扩增时间20min。

7.一种用于检测产气荚膜梭菌的试剂盒，其特征在于：包括权利要求1所述的引物和探针组合。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于：该试剂盒还包括重悬缓冲液、ddH₂O、醋酸镁溶液和冻干酶制剂，所述冻干酶制剂包括dNTP、单链结合蛋白、recA重组酶、DNA聚合酶、核酸外切酶、三(羟甲基)甲基甘氨酸、聚乙二醇、二硫苏糖醇和肌酸激酶。