[发明专利]一种制备(S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酸及其衍生物的方法

权利要求书

1.一种制备如式(I)所示的化合物的方法，

式(I)中，R₁，R₂独立地选自氢、C1-C6烷基，C1-C6烷氧基，其特征在于，所述方法包括：

(1)以所述式(I)化合物的外消旋体或式(I)化合物的盐的外消旋体为底物，利用D-氨基酸氧化酶作为催化剂，选择性催化式(I)化合物的R型异构体进行氧化脱氢反应，生成亚胺酸，而式(I)化合物未被催化，保留在反应体系中；

其中，在进行所述氧化脱氢反应前、所述氧化脱氢反应过程中和所述氧化脱氢反应后中的一个或多个时间点向所述反应体系中加入亚胺酸还原剂，所述亚胺酸还原剂用于使所述氧化脱氢反应生成的所述亚胺酸被还原为所述式(I)化合物的外消旋体或式(I)化合物的盐的外消旋体；

所述D-氨基酸氧化酶为选自如下D-氨基酸氧化酶中的一种或多种的组合：来源于三角酵母(Trigonopsis variabilis)CBS 4095的D-氨基酸氧化酶、来自禾谷镰刀菌(Fusariumgraminearum)CS3005的D-氨基酸氧化酶、来自梨孢镰刀菌(Fusarium poae)2516的D-氨基酸氧化酶、来自茄病镰刀菌(Fusarium solani)M-0718的D-氨基酸氧化酶；

(2)将所述式(I)化合物与反应体系分离。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，式(I)中，R₁，R₂独立地选自氢、甲基、乙基、异丙基、甲氧基或乙氧基，所述的盐为碱金属盐或铵盐。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的式(I)所示的化合物为(S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酸或(S)-6,7-二甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酸。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述催化剂为含有离体的所述D-氨基酸氧化酶的粗酶液或胞内表达所述D-氨基酸氧化酶的细胞或者所述D-氨基酸氧化酶的纯酶或者所述D-氨基酸氧化酶的固定化酶。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述细胞为表达D-氨基酸氧化酶的工程菌，所述工程菌的宿主细胞为E.coliBL21(DE3)。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述工程菌含有表达载体pET-28a(+)，所述D-氨基酸氧化酶基因连接在表达载体pET-28a(+)上。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，使所述氧化脱氢反应在有氧环境中进行，所述氧化脱氢反应还生成过氧化氢，所述方法还包括在进行所述氧化脱氢反应前、所述氧化脱氢反应过程中和所述氧化脱氢反应后中的一个或多个时间点还向所述反应体系中加入用于催化分解所述过氧化氢的过氧化氢酶。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述过氧化氢酶为牛肝过氧化氢酶冻干粉。

9.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述过氧化氢酶与所述D-氨基酸氧化酶的酶活比为100～400：1。

10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，使所述反应在辅酶黄素腺嘌呤二核苷酸存在下进行。

11.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，首先构建所述反应体系，然后控制所述反应体系处于设定温度和有氧环境中进行反应，所述反应体系包括所述底物、所述催化剂、溶剂，所述反应体系还选择性的包括pH缓冲剂和/或pH调节剂。

12.如权利要求11所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述反应体系还包括所述的亚胺酸还原剂和/或用于催化分解过氧化氢的过氧化氢酶。