[发明专利]华北地区棉花蚜虫及其寄生蜂检测试剂盒

权利要求书

1.一种检测华北地区棉花蚜虫(Aphis gossypii Glover)的特异性引物对，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.13-14所示。

2.含有权利要求1所述的特异性引物对的试剂盒。

3.一种检测华北地区棉花蚜虫及其寄生蜂的特异性引物对组合，其特征在于，含有以下引物对：

用于检测华北地区棉花蚜虫的特异性引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.13-14所示；

用于检测烟蚜茧蜂【Aphidius gifuensis(Ashmead)】的特异性引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.1-2所示；

用于检测白足蚜小蜂【Aphelinus albipodus Hayat and Fatima】的特异性引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.3-4所示；

用于检测棉刺蚜茧蜂【Binodoxys communis(Gahan)】的特异性引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.5-6所示；

用于检测的宽肩阿莎金小蜂Asaphes suspensus(Nees)和蚜茧蜂金小蜂Asaphesvulgaris Walker通用引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.7-8所示；

用于检测蚜虫宽缘金小蜂【Pachyneuron aphidis(Bouché)】的特异性引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.9-10所示；

用于检测Phaenoglyphis villosa(Hartig)的特异性引物对的核苷酸序列如SEQ IDNO.11-12所示；

用于检测合沟细蜂Dendrocerus carpenteri(Curtis)的特异性引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.15-16所示；

用于检测黄足分盾细蜂Dendrocerus laticeps(Hedicke)的特异性引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.17-18所示。

4.一种检测试剂盒，其特征在于，含有权利要求3所述的特异性引物对组合，且所述特异性引物对组合构成2个多重PCR检测体系和3个单重PCR检测体系，其中，第1个多重PCR检测体系所用的特异性引物序列如SEQ ID NO.1-6所示；第2个多重PCR检测体系所用的特异性引物序列如SEQ ID NO.7-12所示；

3个单重PCR检测体系所用的特异性引物序列分别如SEQ ID NO.13-18所示。

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，还包括Multiplex Master Mix，ddH₂O，牛血清蛋白溶液、四甲基氯化铵、标准阳性模板。

6.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，其工作程序包括以下步骤：

(1)提取待测样品的核酸；

(2)以步骤(1)的核酸为模板，分别进行2个多重PCR和3个单重PCR；

(3)分析PCR产物；

第1个多重PCR检测体系中：

若PCR产物片段为156bp，则为烟蚜茧蜂；

若PCR产物片段为224bp，则为白足蚜小蜂；

若PCR产物片段为374bp，则为棉刺蚜茧蜂；

第2个多重PCR检测体系中：

若PCR产物片段为173bp，则为脊柄金小蜂属；

若PCR产物片段为328bp，则为蚜虫宽缘金小蜂；

若PCR产物片段为413bp，则为Phaenoglyphis villosa；

3个单重PCR检测体系中：

若PCR产物片段为182bp，则为棉蚜；

若PCR产物片段为100bp，则为合沟细蜂；

若PCR产物片段为137bp，则为黄足分盾细蜂。

7.如权利要求4-6任一所述的试剂盒，其特征在于，所述多重PCR反应，其工作体系为：

所述MP1为第1个多重PCR，MP2为第2个多重PCR。