[发明专利]华北地区棉花蚜虫及其寄生蜂检测试剂盒

说明书

本发明提供了华北地区棉花蚜虫及其寄生蜂检测试剂盒。本发明的试剂盒包括两个多重PCR和三个单重PCR检测体系，两个多重PCR检测体系使用的特异性引物序列分别如SEQ ID NO.1‑6、SEQ ID NO.7‑12所示，三个单重PCR检测体系的特异性引物序列分别如SEQ ID NO.13‑18所示。本发明的试剂盒能够对华北地区棉花蚜虫及其8种寄生蜂实现准确检测，片段大小皆在500bp以内，检出限达1000拷贝，灵敏度高、特异性强，耗时短、简便快速，结合单一PCR检测技术，可获得9‑10个物种的信息，在保证检测信息准确性和完整性的同时，快速建立蚜虫‑寄生蜂食物网关系，应用前景良好。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，特别是涉及检测华北地区小麦蚜虫及其寄生蜂的试剂盒及其应用。

背景技术

棉蚜(Aphis gossypii Glover)是华北棉田主要蚜虫种类，它通过取食韧皮部汁液，在棉花生长初期对棉田造成严重危害。杀虫剂的滥用，使棉蚜产生抗药性，在适宜其生长的环境条件下，高密度的棉蚜会使影响棉花质量大幅降低产量。因此棉蚜的防治工作应受到足够的重视，而天敌在对棉蚜种群的控制中起到至关重要的作用。

棉蚜寄生蜂作为棉蚜的重要寄生性天敌，值得我们深入研究。而目前对棉田寄生蜂控制作用的研究，仅局限于棉田僵蚜数量、僵蚜率的调查和僵蚜样品的采集。寄生蜂通过饲养出蜂到形态鉴定，不仅费时费力，而且会因为形态特征的微小模糊而很难鉴定到具体物种。为了准确评估棉田寄生蜂发生动态及其对蚜虫的控制作用，需要建立一套快速准确的分子检测方法，但目前未有针对棉田蚜虫和寄生蜂的系统性标准检测方法。本发明提供了一种高效便捷的分子检测方法，利用多重PCR检测技术灵敏度高、特异性强等特点，在同一反应中，同时检测多个物种，根据电泳条带大小区分不同物种，解决了棉蚜寄生蜂形态鉴定工作的制约问题，为准确鉴定物种和评估寄生蜂对蚜虫的控制作用提供有效手段。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测华北地区棉花蚜虫及其寄生蜂检测试剂盒，以实现对华北地区棉花蚜虫及其寄生蜂的快速检测，为准确鉴定物种和评估寄生蜂对蚜虫的控制作用提供有效帮助。

为实现上述目的，根据线粒体DNA序列，设计筛选得到9对分别针对华北地区棉花蚜虫及其寄生蜂特异性引物，如表1。除一般的引物设计原则外，根据以下标准筛选引物：(1)扩增产物大小在100bp-500bp之间；(2)多重PCR检测体系结果中，不同扩增产物大小相差5bp以上。

表1 引物序列信息

由此，本发明首先提供了一种检测华北地区棉花蚜虫(Aphis gossypii Glover)的特异性引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.13-14所示。

含有核苷酸序列如SEQ ID NO.13-14所示的特异性引物对的试剂盒属于本发明的保护范围。

本发明提供一种检测华北地区棉花蚜虫及其寄生蜂的特异性引物对组合，含有以下引物对：

用于检测华北地区棉花蚜虫的特异性引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.13-14所示；

用于检测烟蚜茧蜂【Aphidius gifuensis(Ashmead)】的特异性引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.1-2所示；

用于检测白足蚜小蜂【Aphelinus albipodus Hayat and Fatima】的特异性引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.3-4所示；

用于检测棉刺蚜茧蜂【Binodoxys communis(Gahan)】的特异性引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.5-6所示；