[发明专利]鸽新城疫病毒单克隆抗体及在制备诊断和检测试剂盒中的应用

权利要求书

1.一种鸽新城疫病毒单克隆抗体，其特征在于：所述单克隆抗体由杂交瘤细胞株pNDVab-E分泌而得。

2.根据权利要求1所述鸽新城疫病毒单克隆抗体，其特征在于：所述杂交瘤细胞株pNDVab-E的制备方法如下：

1)将鸽新城疫病毒接种在9日龄受精SFP鸡胚上，得到扩增后的鸽新城疫病毒；

2)鸽新城疫病毒经灭活后制备疫苗，免疫小鼠后，取免疫小鼠脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞进行融合，得到融合细胞，然后对融合细胞进行培养，筛选得到杂交瘤细胞株pNDVab-E。

3.一种利用权利要求1所述鸽新城疫病毒单克隆抗体在制备鸽新城疫病毒的胶体金诊断试剂盒或检测新城疫抗体的竞争ELISA试剂盒中的应用。

4.一种鸽新城疫病毒的胶体金诊断试剂盒，其特征在于：所述胶体金试剂盒包括试纸卡、所述试纸卡包括PVC底板、及位于PVC底板表面的从加样端开始依次排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，其特征在于：所述金标垫上包含胶体金标记的权利要求1所述鸽新城疫病毒的单克隆抗体，所述硝酸纤维素膜上包被有检测线和质控线。

5.根据权利要求1所述鸽新城疫病毒的胶体金诊断试剂盒，其特征在于：所述胶体金试剂盒还包括样品处理液，所述样品处理液为10mM Tris-HCl、pH为9.0。

6.根据权利要求4所述鸽新城疫病毒的胶体金诊断试剂盒，其特征在于：所述样品垫采用10mM Tris-HCl、pH为9.0的缓冲液处理。

7.一种权利要求4所述鸽新城疫病毒的胶体金诊断试剂盒的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)将标记的权利要求1所述鸽新城疫病毒的单克隆抗体的胶体金均匀的喷涂在玻璃纤维素膜上，烘干得到胶体金结合物垫，即为金标垫；

2)将权利要求1所述鸽新城疫病毒的单克隆抗体包被硝酸纤维素膜T线，作为检测线；将羊抗鼠IgG包被硝酸纤维素膜C线，作为质控线；将固相抗体硝酸纤维素膜烘干，得到反应膜；

3)将样品垫、胶体金结合物垫、反应膜、吸水垫依次粘贴在PVC底板上；切裁得到检测试纸卡，将检测试纸卡装入铝箔袋内包装制得胶体金试剂盒。

8.一种检测新城疫抗体的竞争ELISA试剂盒，包括包被灭活的新城疫病毒标准血凝抑制抗原的酶标板，辣根过氧化物酶(HRP)标记的权利要求1所述的鸽新城疫病毒的单克隆抗体，血清稀释液，洗涤液，阳性对照，阴性对照，底物液A，底物液B和终止液。

9.根据权利要求8所述检测新城疫抗体的竞争ELISA试剂盒，其特征在于：所述洗涤液每升中含有KH₂PO₄ 0.2g，Na₂HPO₄-12H₂O 2.9g，NaCl 8.0g，KCl 0.2g，Tween-20 50ml；

所述血清稀释液：BSA 0.2g，加洗涤缓冲液至100ml；

所述底物液A：0.2M Na₂HPO₄ 25.7ml，0.1M柠檬酸24.3ml，加蒸馏水至50ml，使用前加入3％H₂O₂ 150μl；

所述底物液B：0.2M Na₂HPO₄ 25.7ml，0.1M柠檬酸24.3ml，加蒸馏水至50ml，使用前加入2mg/ml的TMB乙醇溶液2.5ml；

所述终止液：2M的H₂SO₄；

所述阳性对照：新城疫血凝抑制试验标准阳性血清；

所述阴性对照：新城疫血凝抑制试验标准阴性血清。