[发明专利]鸽新城疫病毒单克隆抗体及在制备诊断和检测试剂盒中的应用

说明书

本发明公开了一种鸽新城疫病毒单克隆抗体及在制备诊断和检测试剂盒中的应用，该单克隆抗体具有灵敏度好、特异性强、效价高的优点，胶体金诊断试剂盒用于检测发病鸽或新鲜病死鸽的肝、脾、肺、脑或心的组织匀浆液，以及口鼻腔分泌物中是否有鸽新城疫病毒，达到辅助诊断鸽新城疫的目的。其反应迅速，整个操作时间仅需15min。且不需要专业技术人员，易于推广普及。检测新城疫抗体的竞争ELISA试剂盒，通过检测样品中血清抗体对辣根过氧化物酶标记的抗新城疫单抗结合新城疫抗原的抑制效力，来反应血清中新城疫抗体的效价。该试剂盒操作简便、可靠。

技术领域

本发明涉及农业生物技术领域，是指一种鸽新城疫病毒单克隆抗体及在制备诊断和检测试剂盒中的应用，具体为抗鸽新城疫病毒单克隆抗体及其鸽新城疫病毒的胶体金诊断试剂盒和检测新城疫抗体的竞争ELISA试剂盒。可以用于鸽新城疫病毒的现场快速诊断以及新城疫免疫后抗体的定量检测。

背景技术

新城疫(Newcastle Disease，ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)强毒株引起的、以感染禽类为主的一种急性、高度接触性传染病。新城疫不仅可对家禽造成严重危害，对国际贸易也有严重影响。世界动物卫生组织(OIE)将新城疫列为法定报告的动物疫病，我国农业部将其列为一类动物疫病。

尽管对该病的历史和起源还存在争议，但目前普遍认为1926年是全球第一次新城疫大流行的开始。自此之后，全球范围内共发生了四次新城疫大流行，每次大流行均由不同基因型的NDV所引起：第一次全球大流行(1920s至1960s)主要是由基因II、III和IV等三种主要基因型的NDV所引起的，危害的对象主要是鸡，水禽、鸟类等几乎不发病。第二次全球大流行(1960s至1970s)主要危害观赏鸟、笼养鸟等禽类，流行的主要基因型包括基因V和VI型。第三次全球大流行(1970s后期至1980s)首先是由鸽子引起的，主要与基因VIb亚型新城疫病毒有关。第四次全球大流行主要是由基因VII型新城疫病毒引起的，可能也起源于亚洲。目前新城疫在亚洲、非洲、中美洲和南非地区的大多数发展中国家已经成为一种地方流行性疫病，即使在一些发达国家，如日本、韩国等，近年来也有发生新城疫的报道。

新城疫病毒属于副粘病毒科，为单链负股、不分节的RNA病毒。病毒只有1个血清型，但根据F基因的序列可分为两大类：class I和class II。其中class I类病毒为弱毒，class II类病毒又可分为18个基因型(I-XVIII)：其中VII已取代II-VI型，成为鸡ND主导；VI b亚型主要威胁鸽，基因VII型、II型和I型病毒也可从鸽中分离到，但是截至目前，VI b亚型仍是导致鸽发病的最主要的基因型。

临床上鸽感染新城疫主要表现为最急性、急性、亚急性和慢性四个临床表现型。最急性型多见于流行初期和雏鸽，常无明显症状而突然死亡。最常见的是急性型，主要表现为头颈扭曲、肌肉震颤、麻痹、共济失调和转圈等神经症状，以及畏寒缩颈、呆立、拉黄绿色稀粪等消化系统症状。亚急性和慢性型多由急性型转化而来。鸽新城疫病毒可感染不同品种、日龄、性别的鸽，但以乳鸽、青年鸽最为易感、且发病率、死亡率较高。一年四季均可发生，但以春秋季多发，往往呈地方流行性。发病率和死亡率差异较大，与鸽的日龄、免疫水平、饲养密度、环境等密切相关。该病在我国鸽群发病和流行，并造成较高的发病率和死亡率，已遍及我国绝大多数养鸽地区。是目前威胁肉鸽和信鸽的第一大疫病。

目前，新城疫的诊断主要有病毒分离和鉴定、血凝和血凝抑制、荧光定量PCR等免疫学和分子生物学方法。对于鸡新城疫病毒的检测已经发展了胶体金试纸条等现场快速检测技术，但并没有针对鸽新城疫病毒检测的现场快检技术。鉴于临床上检测鸽新城疫的重大需求，研制检测鸽新城疫的现场快检技术具有重要价值和意义。