[发明专利]一种减弱环糊精葡萄糖基转移酶产物抑制的方法

说明书

本发明涉及一种减弱环糊精葡萄糖基转移酶产物抑制的方法，属于酶技术领域。本发明提供了一种减弱环糊精葡萄糖基转移酶产物抑制的方法，所述方法为先配制明胶溶液，将得到的明胶溶液中加入环糊精葡萄糖基转移酶中并混合均匀，然后将得到的混合溶液倒入平板中，成一定厚度，将倒入平板中的溶液进行冷却吸附，得到凝胶薄膜，再将得到的凝胶薄膜切成小碎片，用戊二醛溶液浸泡交联，最后将凝胶碎片洗净，得到可减弱环糊精葡萄糖基转移酶产物抑制的固定化环糊精葡萄糖基转移酶。该方法不仅能有效减弱环糊精葡萄糖基转移酶的产物抑制现象，而且制备工艺简单，成本较低，制得的固定化酶稳定性和重复利用性好。

技术领域

本发明涉及一种减弱环糊精葡萄糖基转移酶产物抑制的方法，属于酶技术领域。

背景技术

环糊精凭着内疏外亲的性质能包合许多疏水性客体分子而改变他们的理化性质，在各个领域有许多广泛的应用。目前，工业上环糊精均是通过环糊精葡萄糖基转移酶环化反应作用于淀粉底物进行合成，随着反应的进行，体系中环糊精含量逐渐升高，部分环糊精会与酶自身结合影响其活性，进而影响反应效率，造成产物抑制现象。

目前，研究者主要通过定点突变、添加有机试剂和膜分离手段来解决环糊精生产过程中的产物抑制问题。但是，使用定点突变技术一生物技术手段改造环糊精葡萄糖基转移酶虽然简单易行、重复性好，但往往引起酶其他性质(如酶活力、产物特异性、热稳定性等)的改变；使用膜分离技术虽能根据分子量大小对产物中环糊精进行有效分离从而减弱产物抑制，但淀粉极其引起膜的堵塞，效果不显著，操作繁琐，成本较高；添加有机试剂一方面会导致成本的增加，另一方面试剂的残留限制了环糊精在食品领域的应用。

同时，这三种手段中采用的酶为游离的，均不可重复使用。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了一种减弱环糊精葡萄糖基转移酶产物抑制的方法，该方法不仅能有效减弱环糊精葡萄糖基转移酶的产物抑制现象，而且制备工艺简单，成本较低，制得的固定化酶稳定性和重复利用性好。

本发明的技术方案如下：

本发明提供了一种减弱环糊精葡萄糖基转移酶产物抑制的方法，所述方法为将环糊精葡萄糖基转移酶进行固定化来减弱其产物抑制；所述固定化为先配制明胶溶液，将得到的明胶溶液中加入环糊精葡萄糖基转移酶中并混合均匀，然后将得到的混合溶液倒入平板中，成一定厚度，将倒入平板中的溶液进行冷却吸附，得到凝胶薄膜，再将得到的凝胶薄膜切成小碎片，用戊二醛溶液浸泡交联，最后将凝胶碎片洗净，得到可减弱环糊精葡萄糖基转移酶产物抑制的固定化环糊精葡萄糖基转移酶；所述产物为环糊精。

在本发明的一种实施方式中，所述产物为β-环糊精。

在本发明的一种实施方式中，所述明胶溶液的溶质质量百分比浓度为5％-12％。

在本发明的一种实施方式中，所述将得到的明胶溶液中加入环糊精葡萄糖基转移酶中并混合均匀，要求明胶溶液预先恒温至45℃，环糊精葡萄糖基转移酶加入量为溶质质量的5％-30％。

在本发明的一种实施方式中，所述将得到的混合溶液倒入平板中，要求将得到的混合溶液立即倒入平板中，防止分层。

在本发明的一种实施方式中，所述倒入平板的厚度为2-8mm。

在本发明的一种实施方式中，所述冷却为在4℃下进行放置冷却，冷却吸附时间为30-90min。

在本发明的一种实施方式中，所述戊二醛溶液浓度为0.1％-0.5％。

在本发明的一种实施方式中，所述交联温度为0-30℃，交联时间为0.5-3h。

本发明提供了上述减弱环糊精葡萄糖基转移酶产物抑制的方法制备得到的环糊精葡萄糖基转移酶。

本发明提供了上述减弱环糊精葡萄糖基转移酶产物抑制的方法在生产环糊精及其衍生物方面的应用。