[发明专利]一种多样性代谢产聚羟基脂肪酸酯的海洋细菌及应用在审
申请号: | 201810288426.X | 申请日: | 2018-04-03 |
公开(公告)号: | CN108587940A | 公开(公告)日: | 2018-09-28 |
发明(设计)人: | 田宇;汤凯;崔嵘;詹佩文;杨玉洁;刘克韶;邵智生;金光智 | 申请(专利权)人: | 中海石油(中国)有限公司湛江分公司;厦门大学 |
主分类号: | C12N1/20 | 分类号: | C12N1/20;C12P7/62;C12R1/01 |
代理公司: | 广州市南锋专利事务所有限公司 44228 | 代理人: | 李慧 |
地址: | 524057*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 聚羟基脂肪酸酯 保藏 菌株 海洋细菌 摇床培养 平台期 种子液 氯仿 代谢 中国微生物菌种 次氯酸钠溶液 多样性 对数生长期 培养基平板 三相混合物 微生物中心 种子培养基 析出 代谢方式 离心收集 培养条件 应用步骤 培养基 转接 冷甲醇 干重 菌体 过滤 细菌 应用 管理 | ||
1.多样性代谢产聚羟基脂肪酸酯的海洋细菌(
2.如权利要求1所述多样性代谢产聚羟基脂肪酸酯的海洋细菌(
3.如权利要求2所述产聚羟基脂肪酸酯的应用,其特征在于,步骤如下:
(1)将菌株从保种管中取100μl涂布于2216E平板上,经过2-3次的纯化,接入种子培养基RO中,在28℃,160rpm摇床培养24h至对数生长期,得种子液;
(2)2%接种量的种子液转接至五种代表菌株营不同代谢方式的培养基,在28℃,160rpm摇床培养至近平台期;
(3)经离心收集近平台期的菌体并冷冻干燥,称量干重并按照每克干重加入30ml氯仿以及30ml次氯酸钠溶液,在30℃,150rpm摇床中维持90min,混合物即可分为三相,用移液枪移去最上层后过滤得到最下层的溶有聚羟基脂肪酸酯的氯仿成分,最后由冷甲醇法析出产物。
4.如权利要求3所述产聚羟基脂肪酸酯的应用,其特征在于步骤(1)中,所述2216E培养基的配方如下:蛋白胨5.0g,酵母膏1.0g,柠檬酸铁0.1g,氯化钠19.45g,氯化镁5.98g,硫酸钠3.24g,氯化钙1.8g,氯化钾0.55g,碳酸钠0.16g,溴化钾0.08g,氯化锶34.0mg,硼酸22.0mg,硅酸钠4.0mg,氟化钠2.40mg,硝酸铵1.60mg,磷酸氢二钠8.0mg,蒸馏水1000g,pH7.6。
5.如权利要求3所述产聚羟基脂肪酸酯的应用,其特征在于步骤(1)中,所述RO培养基的配方如下: RO培养基(W/V):蛋白胨1.0g,酵母膏1.0g,乙酸钠1.0g,氯化钠20.0g,氯化钾0.3g,七水合硫酸镁0.5g,氯化铵0.3g,磷酸氢二钾0.3g,二水合氯化钙38.0mg,蒸馏水1000g,pH8.0。
6.如权利要求3所述产聚羟基脂肪酸酯的应用,其特征在于步骤(2)中,所述五种代表菌株营不同代谢方式的培养基分别为:
自养培养基(C+S组):碳酸氢钠2.5mmol,硫代硫酸钠1mmol,人工海水1L;
异养培养基A(Glc组):葡萄糖100μmol,人工海水1L;
异养培养基B(Glc+C组):葡萄糖100μmol,碳酸氢钠2.5mmol,人工海水1L;
化能异养培养基(Glc+S组):葡萄糖100μmol,硫代硫酸钠1mmol,人工海水
1L;
混养培养基(Glc+C+S组):葡萄糖100μmol,碳酸氢钠2.5mmol,硫代硫酸钠1mmol,人工海水1L;
其中,人工海水的配方均为:氯化钠20.0g,氯化钾0.3g,七水合硫酸镁0.5g,氯化铵0.3g,磷酸氢二钾0.3g,二水合氯化钙38.0mg,蒸馏水1000g,pH7.4。
7.如权利要求3所述产聚羟基脂肪酸酯的应用,其特征在于步骤(3)中,所述离心条件为:7000g×15min。
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